액체 크로마토그래피 질량분석법을 이용한 24시간 요 중 유리 코르티솔 측정

Abstract

서론 국내에서는 쿠싱 증후군을 진단하기 위한 검사 중 24시간 요중 유리 코르티솔을 측정하기 위하여 주로 면역측정법을 사용해왔다. 그러나 이 방법은 교차반응이 일어나거나 정확도가 떨어지는 등의 단점이 있어 액체 크로마토그래피 질량분석법(LC-MS/MS)을 이용하여 24시간 요중 유리 코르티솔(Urinary Free Cortisol, UFC)을 개발하여 이 검사법을 평가하였다. 재료 및 방법 본 연구에서는 3가지 농도의 정도관리물질을 만들어 하루 8회 측정하여 LC-MS/MS 에 의한 UFC 의 일내 정밀도를 평가하였고 20일간 일간정밀도를 평가하였다. 표준물질을 이용하여 정확도를 검증하였고 추출하지 않은 분석표준 물질용액의 측정값으로 공 시료만 추출한 후 분석표준물질을 첨가하여 구한 측정값을 비교하여 매트릭스 효과를 평가하였으며 상온과 냉장에서 5일간 보관하여 검체 안정도를 평가하였고, 검출한계, 정량한계 역시 검증하였다. 상관성을 평가하기 위해 45명의 24시간 요 환자 검체를 이용하여 미국 ARUP 검사실의 액체 크로마토그래피 질량분석법 및 본 검사실의 화학발광면역측정법과 비교하였으며 프레드니솔론에 대한 교차반응성을 평가하기 위해 프레드니솔론이 첨가된 검체를 측정하였다.결과 LC-MS/MS 에 의한 UFC 의 일내 정밀도와 일간 정밀도 모두 10% 미만이었고 정확도는 5% 미만으로 검증되었다. 매트릭스 효과는 5% 미만이었고 검체 안정도 역시 한 검체를 제외하면 예상 값의 5% 이내였다. 1 ng/ml에서 검출한계, 정량한계가 검증되었다. ARUP 검사실과 비교하여 37%의 양성 비례오차가 있었으나 상관성은 우수하였고(y = 1.37x + 0.19, r = 0.999). NIST 표준액 기준으로 정확도 평가에서 허용범위 내 수준이라 임상적으로 활용이 가능하다고 판단되었다. LC-MS/MS 에 의한 UFC 의 프레드니솔론에 대한 교차반응성은 화학발광면역측정법보다 우수하였다.결론 액체 크로마토그래피 질량분석법은 좋은 정밀도, 민감도 및 정확성을 보이고 프레드니솔론에 대한 특이도가 높아서 쿠싱 증후군을 진단하는 데에 유용할 것이라 판단되었다.