이식신 기능부전 환자에서 이식신 생검 조직 내 Toll-like receptor 아형 표현

Abstract

[한글]Toll-like receptor (TLR)은 내재면역의 매개자로 알려져 왔으나, 최근들어 적응면역과의 연관성 뿐만 아니라 염증반응 및 각종 이식 후 거부반응에도 관련되어 있음이 보고되고 있다. 본 연구는 신이식 후 발생하는 다양한 거부반응에서 TLR 아형의 표현을 알아보기 위하여 급성거부반응(acute rejection; AR, n=11), 만성거부반응(chronic rejcetion; CR, n=15) 및 만성 cyclosporine A (CsA) 신독성(n=19)의 신생검 조직에서 TLR 아형의 mRNA 및 단백 표현을 검색하였다. 질환의 진단은 Banff 97에 따라 분류하였으며, Banff 2005에서 변형된 내용을 참고하였다. 대조군 조직(n=7)은 신세포암 환자의 정상 피질 부위에서 얻었다. TLR 2, 3, 4 및 9의 mRNA 표현은 SYBR green을 사용하는 realtime RT-PCR로 측정하였고, 단백의 분석은 면역조직화학염색(immunohistochemistry)으로 시행하였다. TLR 2와 3의 mRNA 표현은 정상 대조군과 비교하여 모든 거부반응에서 차이가 없었다(P>0.05). 대조적으로, TLR 4의 mRNA 표현은 급성거부반응(P<0.05), 만성거부반응(P<0.05) 및 CsA 신독성(P<0.0001)에서 모두 통계적으로 유의하게 증가하였다. 특히, TLR4의 mRNA 표현은 CsA 신독성군에서 급성거부반응군이나 만성거부반응군에 비하여 의미있게 높았다(P<0.01). 그러나, 급성거부반응군과 만성거부반응군 사이에는 통계적으로 유의한 차이가 없었다(P>0.05). TLR9의 mRNA 표현은 CsA 신독성군(P<0.05)에서만 유의하게 증가되어 있었다. 면역조직화학염색에서 TLR의 단백 표현은 모든군에서 대조군과 차이가 없었다. TLR4와 9는 TLR2와 3에 비교하여 사구체와 세관에서 현저히 염색되었다. 본 연구의 결과는 TLR4의 표현이 병인과는 무관한 신장이식 후 다양한 손상에 의하여 발생할 수 있음을 시사하였고, 만성 CsA 신독성군에서 현저한 증가된 TLR4와 9의 mRNA 표현은 상이한 병변의 차이를 나타내어 만성거부반응과는 별개의 진단기준의 예로 사용될 수 있음을 시사하였다

[영문]Toll-like receptor (TLR) has been known as a mediator of innate immunity, but recent reports showed that TLR provided a link to adaptive immunity and was involved in allograft rejection as well as inflmmation. To explore the expression patterns in various conditions of renal transplantation, this study examined TLR subunits mRNA and protein expression in renal allograft biopsy of acute rejection (AR, n=11), chronic rejection (CR, n=15), and chronic cyclosporine (CsA) nephrotoxicity (n=19) patients. The diagnosis was made according to Banff97 classification with Banff2005 modification. Control tissues (n=7) were obtained from normal renal cortical tissue of renal cell carcinoma patients. TLR 2, 3, 4, and 9 mRNA expression was analyzed by realtime RT-PCR using SYBR green and each protein expression by immunohistochemistry. TLR 2 and 3 mRNA expressions were not significantly different in allograft samples compared with control (P>0.05). On the contrast, TLR 4 mRNA was significantly increased in AR (P<0.05), CR (P<0.05), and CsA toxicity(P<0.0001). TLR 4 mRNA expression was significantly higher in CsA toxicity than that of acute and chronic rejections (P<0.01), however, no significant difference was observed between AR and CR. TLR 9 mRNA was only upregulated in CsA toxicity (P<0.05). TLR 4 and 9 protein expression was higher than TLR 2 and 3 in all tested groups. These results suggested that TLR 4 expression increased with renal transplant damage irrespective of causes. A strong mRNA expression of TLR 4 and 9 in chronic CsA toxicity among allograft samples may reflect different pathogenesis and help in the differential diagnosis with CR