ShTGFβ2 와 shDaxx 를 발현하는 아데노바이러스의 항 종양 효과

Abstract

TGFβ(transforming growth factorβ)는 정상세포와 초기 종양세포에서는 종양을 억제하는 역할을 하지만, 종양이 점차 자라면서 종양의 성장을 촉진하는 방향으로 그 기능이 바뀌고, Daxx (death-associated protein 6)는 아데노바이러스 감염시아데노바이러스 복제에 부정적인 역할을 한다. 췌장암 세포에 TGFβ2 의 발현량을 감소시켜 암세포의 성장 및 증식을 억제하는 동시에 Daxx의 발현량을 감소시켜 아데노바이러스의 복제 증가를 통해 항 종양 효과를 더욱 개선시키고자 실험을 진행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 정상 췌장 세포에 비해 췌장암 세포에서 TGFβ2 의 발현양이 늘어났기 때문에 췌장암 세포에서TGFβ2 shRNA (shTGFβ2) 아데노바이러스를 이용하여 TGFβ2 단백질의 양을 감소시키는 것이 필요했고, 실제 shTGFβ2 아데노바이러스를 췌장암 세포에감염시켰더니 TGFβ2가 효과적으로 감소된 것을 관찰할 수 있었다. shTGFβ2아데노바이러스가 암세포의 생존 및 증식을 억제시키는지 확인해 보기 위해서 MTT assay, 군락형성분석(clonogenicassay)실험을 진행하였다. MTT assay 결과 TGFβ2의 양을 감소시켰더니 HPAC세포에서 shTGFβ2아데노바이러스가 대조군 바이러스에 비해서 유의성있게 암세포의 생존이 감소되었지만BxPC3 세포에서는shTGFβ2아데노바이러스가 암세포의 생존과 증식을 감소시키지는 못했다. 그러나 군락형성분석(clonogenicassay)실험에서는 두 가지 췌장암 세포주 모두에서 shTGFβ2 아데노바이러스를 감염시켰을 때 군락형성이 감소되는 것을 확인하였다. 단기간의 암세포 생존을 확인해 보는 MTT assay결과와 장기간의 암세포 생존을 확인해 볼 수 있는 군락형성분석의 결과가 달랐기 때문에 그 이유를 알아보기 위해서 시간대 별로 세포를 얻어 시간에 따른 세포내 신호 전달의 변화를 보고자 western blot 을 시행하였다. 시행한 결과 2일이라는 단기적 시간에는 p-ERK, p-Akt 밴드가 나타났다. 그렇지만 시간이 지나면서p-ERK, p-Akt 밴드가 사라지게 되면서 장기간의 암세포 생존을 줄이는 효과를 보였다. 한편 Daxx shRNA (shDaxx) 아데노바이러스를 이용하여 BxPC3세포에 Daxx의발현양을 감소시켰더니 아데노바이스의 복제에 필수적인단백질인E1A의 발현이 증가되었고, 생산도 증가된 것을 확인할 수 있었다. 그러나 HPAC 세포에서는 세포내Daxx 단백질의 양이 적어 그러한 효과를 확인할 수 없었다. shTGFβ2 와shDaxx 를 함께 넣은 바이러스를 두 가지 췌장암 세포주에 감염시켰더니 TGFβ2 와 Daxx 모두의 발현량이 감소하였다. 세포증식 억제 및 군락형성에 신호전달에는 생체 내에서는 어떠한 효과를 보이는지 확인해 보고자 동물실험을 진행하였을 때 shTGFβ2, shDaxx, shTGFβ2-shDaxx 3가지 아데노바이러스 모두 마우스의 종양의 크기를 줄이는 효과를 보였다. 그러나 HPAC 세포를 이용한 생체 내 실험에서 3가지 바이러스 간의 차이는 보기 힘들었다.그렇지만 생체 외 실험을 진행해 본 결과BxPC3 세포에서는 shDaxx 아데노바이러스가 아데노바이러스의 복제에 필수적인 단백질인 E1A의 증가와 생산을 증가 시킬 수 있었기 때문에shTGFβ2로 인한 항 종양효과와 아데노바이러스의 복제 및 생산을 증가시켜 더욱 더 항 종양 효과를 기대할 수 있을 것으로 생각한다. 앞으로 이것을 동물실험으로 입증하는 것이 필요하겠다.