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4-1BBL의 발현 유도와 TGFβ2 발현 억제를 동시에 유도하는 종양선택적 살상 아데노바이러스의 항종양 효과

Other Titles
 Anti-tumor effect of oncolytic adenovirus expressing 4-1BBL and shRNA of TGFβ2 
Authors
 강수진 
Issue Date
2014
Description
의과학과/석사
Abstract
암세포는 면역반응의 회피를 위해 면역체계를 약화시키는 cytokine을 분비하기 때문에 치료제에 저항성이 생기거나 진행되는 암 치료에는 한계가 있다. 그 대안으로 면역 증진 효과를 가져오는 치료법이 개발되고 있으며, 본 실험에서는 면역증진에 관련된 유전자를 종양 선택적인 아데노바이러스를 통해 전달하고자 한다. 4-1BB는 co-stimulatory 분자로 T 세포의 활성과 생장에 필수적인 물질로 알려져 있다.TGFβ는 면역억제 반응을 유도하는 가장 잘 알려진 물질이며 그 외에도 다양한 반응에 관여하여 세포의 증식을 돕고 전이에도 관여한다. 이러한 이유로 T 세포에 있는 4-1BB와 결합하는 4-1BBL의 발현과 shTGFβ2로 TGFβ2의 억제를 통해 면역체계의 강화를 유도하였다. 본 실험에서는 4- 1BBL/shTGFβ2를 탑재한 종양 선택적 아데노바이러스를 사용하여 면역체계의 강화를 통해 효율적인 항암효과가 있는지를 검증하였다. 4-1BBL과 TGFβ2의 shRNA를 발현하는 복제불능 아데노바이러스를 감염시켜 western blot 분석을 통해 4-1BBL의 발현증진을 확인하였고 real-time PCR과 ELISA를 통해 TGFβ2의 발현억제를 확인하였다. 두 유전자를 발현하는 바이러스를 감염시켰을 때 암세포에서 생존과 전이에 관여하는 단백질의 활성이 감소하였다. 이러한 변화로 인해 암세포의 성질에 영향을 미치는 지를 확인하였다. 두 유전자를 발현시키는 바이러스를 감염시킨 후 MTS 실험을 통해 암세포의 증식능력이 감소하는 것을 확인하였으며, migration 실험을 통해서는 이동능력이 감소하는 것을 확인하였고, invasion 실험을 통해 침투능력의 억제를 검증하였다. 이런 결과들은 4-1BBL을 증강시켰을 때의 효과보다는 TGFβ2를 억제시켰을 때 나타났다.건강한 사람의 PBMC를 바이러스를 감염시킨 암세포와 같이 배양하여 ELISA 검사를 하였을 때, 각각의 유전자를 넣었을 때보다 두 유전자를 동시에 발현하는 바이러스에서 IFN-γ, IL-2, GM-CSF의 양이 증가하는 것으로 면역 증강의 효과를검증하였다. 실질적으로 치료제로서 기능을 할 수 있는지를 확인하기 위해 동물실험을 실행하였다. 4-1BBL과 shTGFβ2를 탑재한 종양선택적 살상 아데노바이러스 감염에 의해 쥐 피하에 형성된 종양의 자라는 속도가 다른 그룹의 쥐와 비교하였을 때 느린 것을 관찰하였다. 그리고 다른 그룹의 쥐보다 생존능력이 좋은 것을 검증하였다. 바이러스를 감염시키고 2주 후에 비장세포를 꺼내 LDH assay를 통해 확인하였을 때 암세포에 특이적인 면역성이 증가한 것을 확인하였다. 위의 결과들을 통해 4-1BBL의 발현유도 및 TGFβ2 발현의 억제는 암세포의 성장과 전이의 억제효과를 가져올 수 있으며암세포 주변의 면역 증강의 효과로 암치료에 도움을 줄 수 있을 것으로 생각된다
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1. College of Medicine (의과대학) > Others (기타) > 2. Thesis
URI
https://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/134910
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