ADAM-9의 발현이 위암의 침윤능에 미치는 영향

Abstract

ADAM (A disintegrin and Metalloprotease)-9은 세포막에 부착되어있는 당화단백질로, 넓은 범위의 세포적 작용에서 다양한 역할을 한다. ADAM-9은 여러 암에서 과발현이 되어있으나 위암에서의 생물학적인 역할은 아직 알려져 있지 않다. 본 연구에서는 ADAM-9의 단백분해효소 활성도가 위암에서 침윤과 전이와 관련이 있음을 제시하였고, 항-전이 치료를 위한 표적으로 가능성을 제시하였다.본 연구에서는 24개의 위암 세포주에서 ADAM-9의 mRNA와 단백질의 발현의 정도를 알아보았다. ADAM-9의 단백분해효소 활성도는 fluoregenic ADAM-9 기질 (R&D systems)을 사용하여 측정하였다. ADAM-9의 protease activity와 침윤과의 관련성을 알아보기 위해 matrigel이 도말된 trans-well을 이용하였으며, 특이 항-ADAM-9 단클론 항체 (RAV-18, Raven Biotechnologies, Inc.)는 항-침윤 특징을 측정하기 위해 사용하였다. ADAM-9의 단백분해효소 활성도와 단백질 발현은 각각의 세포주 마다 다양하게 나타났으며 단백분해효소 활성도와 단백질 발현 (mature form)은 상관성이 있었다 (R2 = 0.49). ADAM-9의 단백분해효소 활성도의 중간 값을 기준으로 1SD 이상인 세포주를 활성도가 높은 그룹으로, 1SD 이하인 세포주를 활성도가 낮은 그룹으로 선정하였다. 높은 활성도의 세포주는 SNU-638과 YCC-1, MKN-74, MKN-28이고 낮은 활성도의 세포주는 YCC-6, YCC-7, HS-746T이다. 활성도가 높은 세포주들은 ADAM-9 저해제인 RAV-18을 농도별로 처리했을 때, 농도의존적으로 활성도가 감소하였으나 활성도가 낮은 세포주들은 효과가 없었다. ADAM-9의 단백분해효소 활성도와 침윤의 기저치는 상관관계가 성립되지 않았으나, RAV-18을

처리하였을 때 활성도가 높은 세포주들은 침윤이 감소하였고, 활성도가 낮은 세포주들은 효과가 없었다. 활성도가 낮은 세포 주들을 저산소 환경(1% O2, 5% CO2, 37℃)에 노출 시켰을 때 활성도와 침윤능은 모두 유의하게 증가하였으며, 이때 RAV-18을 처리하면 활성도와 침윤능은 농도의존적으로 감소하였다. RAV-18은 ADAM-9의 단백분해효소 활성도가 높은 세포주에서 EGFR과 Erk의 인산화를 억제하였으나 활성도가 낮은 세포 주에서는 그렇지 못했다. 이를 통하여 ADAM-9과 관련된 침윤능은 적어도 MAPK pathway를 통하여 조절된다고 생각된다.본 연구에서는 위암에서 ADAM-9의 단백분해효소 활성도가 다양하게 나타난다는 것을 알 수 있었고, ADAM-9의 단백분해효소 활성도는 침윤과 전이의 process의 저해를 위한 표적으로의 의미가 있을 것으로 생각된다.