0 242

Cited 0 times in

GM-CSF와 B7.1을 발현하는 아데노바이러스의 T 세포매개 항종양 효과

Other Titles
 T cell mediated anti-tumor effect of oncolytic adenexpressing GM-CSF and B7.1 
Authors
 최경주 
Issue Date
2004
Description
의과학과/석사
Abstract
[한글]증식 불능 아데노바이러스를 이용한 암 유전자 치료는 감염된 세포에서만 치료 유전자가 발현되어 그 효과가 일시적이라는 단점 때문에 사용에 많은 한계가 있었다. 이러한 단점을 극복하고자 p53이 불활성화된 암세포에서만 세포살상 효과를 나타내는 종양 특이적 살상 아데노바이러스는 암세포 내에서 자가 복제하여 주변으로 확산하여 항종양 효과를 증대시킬 수 있을 뿐 아니라 기존의 증식 불능 아데노바이러스보다 유전자 전달 효율이 우수한 것으로 알려져 있다. 최근에 급속한 세포 면역학의 발달로 항암 면역반응에 관여하는 세포들과 그 작용 기전들이 밝혀지고, 특히 여러 암세포 표면에서 면역반응을 일으키는 종양 항원들이 보고됨에 따라 암의 면역학적 치료에 보다 많은 관심을 작게 되었다. Granulocyte macrophage-colony stimulating factor(GM-CSF)는 dendritic cell(DC)의 분화와 성장을 조절하는 사이토카인으로써 T 세포 활성화를 위한 보조적인 역할을 한다. 이러한 배경 하에 본 연구에서는, 아데노바이러스의 초기 유전자인 E1B 55kDa이 소실된 암세포 특이적 증식 가능 아데노바이러스를 유전자 전달 매개체로 이용하여, 암세포에 대하여 강한 면역반응을 유도하는 GM-CSF와 co-stimulatory 분자인 B7.1을 종양세포 특이적으로 고발현시켜 암세포에 대한 살상 효과의 개선 여부를 검증하고자 하였다. 먼저, GM-CSF와 B7.1 유전자를 종양 특이적 살상 아데노바이러스인 YKL-1과 증식 불능 아데노바이러스인 dl 324에 각각 도입하여 Y/G/B와 dl/G/B를 제작하였다. 제작한 아데노바이러스의 GM-CSF와 B7.1의 발현 정도를 ELISA와 FACS analysis를 시행하여 확인하였으며, dl/G/B와 B7.1 단백질의 발현량이 크게 증가하는 것을 관찰하였다. 또한, C57BL/6 마우스에 형성된 B16F10 흑생종에 Y/G/B를 투여한 경우, CD4+ CD8+ T 세포 및 splenic DCm이 군집 비율이 대조군인 YKL-1을 투여한 경우에 비하여 현격히 증가하였으며, 생체 내 항종양 효과도 크게 증가하였다. 종양 특이적 독성 T 세포의 활성화를 분석할 수 있는 ELISpot assay와 intracellular staining을 시행한 결과, Y/G/B를 투여한 마우스의 경우 PBS 또는 YBL-1을 투여한 마우스 보다 IFN-γ를 분비하는 세포가 크게 증가하여 종양 내에 고발현된 GM-CSF와 B7.1에 의한 종양 항원 특이적 T-세포 매개 세포살상에 의하여 항종양 효과가 개선되었음을 알 수 있었다. 이와 더불어, Y/G/B 치료군에서 종양조직의 괴사가 두드러지게 관찰되었고, PBS와 YKL-1 대조군에 비하여 종양조직 내로의 림프구의 세포군들을 관찰할 수 있었으며 이는 세포매개 면역반응을 일으키는 T 세포가 항종양 효과에 중용한 역할을 하는 것으로 생각된다. 이상의 결과로, 본 연구에서 제작한 Y/G/B 종양 특이적 살상 아데노바이러스는 바이러스의 증식에 의한 암세포 사멸을 유도할 뿐 아니라 감염된 세포에서 GM-CSF와 B7.1을 지속적으로 발현시켜 숙주의 항종양 면역능이 증가되어 효율적으로 암세포를 살상시키기 때문에 암 유전자 치료에 유용하게 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
[영문]Oncolytic adenoviral vectors are currently being developed as biological anti-cancer therapeutic agents. Coupling the lytic function of oncolytic adenovirus with virus-mediated transgene delivery represents a powerful extension of this treatment. A clear benefit is amplification of the therapeutic gene, as the replication vector would be able to infect and deliver the therapeutic gene to adjacent cells as well as the cells infected initially. Granulocyte-macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) is one of the most potent stimulators of a specific and long-lasting antitumor immunity and its importance for the maturation of antigen presenting cells into stimulators of T cell activation has been well documented. In addition, the B7 family has been shown to take an integral part of the anti-tumor response. However, most tumor cells lack expression of costimulatory molecules on their surface, resulting in an escape recognition by the immune system. To increase the potential anti-tumor activity of oncolytic adenovirus, we constructed a E1B 55kDa-deleted oncolytic adenoviral vector Y/G/B, which expresses GM-CSF and B7.1. The expression of GM-CSF and B7.1 was confirmed by ELISA and FACS analysis, respectively. The therapeutic efficacy of Y/G/B adenovirus was evaluated in immunocompetent mice bearing murine melanoma B16F10 tumors. Significant inhibition of tumor growth was shown in subjects treated with oncolytic vectors compared to those treated with PBS. Moreover, Y/G/B oncolytic adenovirus demonstrated enhanced anti-tumor activity and a higher incidence of complete tumor regression compared to an analogous vector, YKL-1, that lacks the GM-CSF and B7.1 transgenes. Survival was also significantly prolonged in Y/G/B treated mice. In order to establish that anti-tumor effect is associated with the generation of tumor-specific immune response, we examined the cytolytic activity by IFN-γ ELISpot assay and intracellular staining of IFN-γ and IFN-α. We observed that Y/G/B induced significantly higher T cell-mediated antitumor activity than YKL-1. Given the results shown in this study, oncolytic adenovirus-mediated GM-CSF and B7.1 gene transfer provides a potential therapeutic strategy for the management of neoplasia.
URI
https://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/128682
Appears in Collections:
2. Thesis / Dissertation (학위논문) > 1. College of Medicine (의과대학) > Master's Degree (석사)
사서에게 알리기
  feedback
Export
RIS (EndNote)
XLS (Excel)
XML

qrcode

Items in DSpace are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.

Browse