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In Vitro assessment on viability of human periodontal ligament cells after storage in chlorophyllin-added medium

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 클로로필린이 첨가된 탈구치아 보존액에서의 치주인대 세포 생활력에 대한 연구. 
Issue Date
Dept. of Dentistry/박사
[한글] 본 연구의 목적은 클로로필린이 치주인대 세포 생활력에 미치는 영향을 평가하는데 있다. 치주인대 세포는 건강한 사람에서 발치한 소구치의 치주인대 조직으로부터 채취하여 배양하였다. 비교 기준을 설정하기 위하여, HBSS 내에서 37℃로 보관한 치주인대 세포수의 50%가 생존하는데 소요되는 시간을 MTT 분석법에 의해 측정하였다. 그 결과는 6시간이었다. HBSS에 클로로필린 10, 100, 500 nM이 각각 첨가된 3군의 실험 보존액과 F-medium, ViaSpan, Likorol 등 모두 6군의 실험 보존액을 96-well plate에 접종한 후, 치주인대 세포를 동일한 수로 분주하였다. 이를 6시간동안 보관한 후, 각 실험군 보존액에서의 세포 생활력을 MTT 분석법으로 측정하였다. 또한, HBSS와 F-medium 및 클로로필린 500 nM이 첨가된 HBSS군의 세포들에 대해 유식세포 계측을 시행하여 각각의 세포주기를 분석하였다. 실험 결과, 클로로필린 500 nM이 첨가된 HBSS에서 보관한 세포들이 가장 높은 생활력을 나타내었으며, 클로로필린이 첨가되지 않은 HBSS에 비해서 유의하게 양호한 세포 생활력 유지 능력을 보였다. 클로로필린으로 처치한 세포들은 클로로필린의 농도가 커짐에 따라 세포 생활력이 증가하는 양상을 나타내었다. 유식세포 계측 결과, HBSS와 F-medium 및 클로로필린 500 nM이 첨가된 HBSS에서 보관한 세포의 77~80%가 G0-G1 단계의 세포 주기로 측정되어, 대부분의 세포들이 안정된 세포 대사 상태를 보이는 것으로 나타났다. 결론적으로, 클로로필린 처치는 치주인대 세포의 생활력 유지에 도움이 되는 것으로 사료된다.
[영문] The aim of this in vitro study was to evaluate the effect of chlorophyllin (CHL) on the viability of cultured periodontal ligament (PDL) cells. PDL cells were obtained from extracted premolars of healthy individuals, and cultured until confluent. For control, the time period of 50% survival of these cells stored in Hank’s balanced salt solution (HBSS) at 37℃ was determined using MTT assay and this was found to be 6 hours. Cultured PDL cells were placed into 96-well plates containing F-medium, ViaSpan, Likorol, and HBSS supplemented with CHL 10, 100, 500 nM respectively, After storage in each of different media for 6 hours, MTT assay was performed to determine cell viability. In addition, based on the results of MTT assay, cell cycle was analyzed using flow cytometry on group of HBSS, F-medium, and HBSS supplemented with CHL 500 nM. The highest cell viability was found in PDL cells stored in HBSS supplemented with CHL 500 nM. CHL-treated cells showed the dose-dependent response to its concentrations. The results of flow cytometry showed that 77~80% of PDL cells in HBSS, F-medium, and HBSS supplemented with CHL 500 nM consisted in G0-G1 phases of the cell cycle, which suggested most of PDL cells were in stable stage. In conclusion, CHL treatment may be of help in maintaining PDL cell viability.
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