신경간세포의 단클론항체 형성

Abstract

[한글]

척추동물의 중추신경계는 신경세포, 별아교세포, 희소돌기아교세포와 미세아교세포로 구성되어 있는데 이 세포들은 신경간세포로부터 증식 및 분화를 통해 이루어진다. 신경간세포로부터 신경세포, 아교세포, 희소돌기아교세포로 어느 시기에 어떤 기전으로 분화되는지는 아직 알려져 있지 않다.

본 실험에서는 신경간세포에 대한 단클론항체를 생성하여 신경간세포의 분화과정을 연구하는 기본적인 재료로 활용하고자 하였다.

생후 1-2일된 흰 쥐의 대뇌에서 신경간세포를 분리하여 EGF가 들어간 무혈청 배지에서 키운 결과 신경간세포를 제외한 대부분의 세포는 죽고 신경간세포만 살아서 둥글고 빛나는 세포군을 형성하였다. 그 세포군은 모두 신경간세포의 세포골격단백질인 nestin을 발현하였다. 배양 7일째에 이차배양 결과 세포들이 분화하여 신경세포, 별아교세포, 희소돌기아교세포가 되었다.

배양 7일째되는 신경간세포를 분리하여 BALB/c에 면역반응시킨 후 비장세포를 얻어 골수종세포와 세포융합을 시켰다. 세포융합 후 하이브리도마 상층액을 이용하여 면역화학염색을 시행한 결과 양성반응을 나타냈다. 단클론항체의 아형을 확인한 결과 5개의 단클론항체가 모두 IgMκ type임을 알 수 있었다.

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핵심되는 말: 신경간세포, 단클론항체, 세포융합, epidermal growth factor

[영문]

Mammalian central nervous system consists of neurons, astrocytes, oligodendrocytes and microglia. These cells are originated from neuroepithelial cells.

Neuroepithelial cells proliferate and differentiate to become mature neural cells. It has not been proven how neuroepithelial cells differentiate into glial precursor cells and neuronal precursor cells. In addition to that, it is to be studied what

kind of stimuli lead glial precursor cells to glial cells. Several kinds of monoclonal antibodies to specific markers of differentiating cells have been isolated to detect how glial precursor cells differentiate into macroglial cells. However, it is unknown how neuronal precursor cells differentiate. Progenitor cells can be isolated by culturing in epidermal growth factor(EGF) containing serum-free medium. After isolating progenitor cells, cells were immunized to BALB/c mice.

Spleen cells from immunized mice were fused with myeloma cells and fused cells were selected by HAT medium. After limited dilution, immunocytochemistry was performed. Some hybridoma supernatant were positive but some were negative. Testing with

positive supernatant resulted that all positive supernatant were IgM type and Igκ-specific.

These monoclonal antibodies to neuronal precursor cells can be used further study on differentiation of neuronal cells in central nervous system.