콜레스테롤(cholesterol) 및 히알유론산(hyaluronic acid) 첨가에 의한 수종 항산균의 시험관내 증식 비교

Abstract

[한글]

인나균 및 서라균의 인공배지를 이용한 배양은 많은 연구가 계속되고 있지만 아직도 만족할만한 보고가 없다. Skinsnes(1974)는 히알유론산을 성분으로하는 배지를 이용하여,그리고 Kato(1978)는 콜레스테롤을 성분으로하는 배지에 인나결절에서 얻은 인나균을 접종한 바 배양가능한 항산균을 배양하였다고 보고하였다. Skinsnes(1974)는 나환자 피부결절의 병리조직학적 소견에서 인나균 주위에 히알유론산이 다량 침작된것에 착안하여 인나균이 이 히알유론산을 균의 성장에 이용한다는 가설을 내었으며, 또한 그들은 히알유론산 함유배지를 개발하여 그 배지에서 인나균의 성공적인 배양을 보고하였다(Skinsnes & Mateuo 1974ab, 1975ab)

한편 Kato 및 Ishaque(1977ab)은 인나균이 숙주조직내 잘 침범하는 피부나 신경조직에서 콜레스테롤이 다량 존재하는 것을 보아서 인나균이 콜레스테롤을 발육소(Growth factor)로 이용하여 세포막 구성성분에 관여할 것이라고 보고하였다. 그들은 콜레스테롤이 함

유된 배지를 만들어서 인나균과 서라균의 배양을 시도한 바 항상균을 분리 배양할 수 있음을 보고하였다. 이에 저자는 인나균 또는 서라균의 인공배양을 시도하기 위해서 개발된 콜레스테롤를 또는 히알유론산 함유배지상에서 배양가능한 각종 항산균(M. tuberculosis

, B.C.G., M. vaccae, M. scrofulaceum, M. kansasii)를 배양하여 콜레스테롤 또는 히알유산론산이 이들 항산균의 발육에 미치는 영향을 관찰한 바 다음과 같은 결과를 얻었다.

1. Dubos 액체배지, 히알유론산 함유 LA-3배지, 콜레스테롤 함유 KI-1배지에 있어서의항산균의 증식양상은 KI-1배지가 가장 우수하였으며 결핵균의 경우 KI-1배지에서 Dubos배지보다 4주, 6주 관찰시 약4배, 3배의 균증식양상을 나타내었으며 B.C.G.는 약10배, 6배, M. vaccae는 약1.5배, 1.2배, M. kansasii는 약2.4배, 2.1배, M. scrofulaceum은 약5.2배, 3.5배의 균증식양상이 계측되었다.

2. 항산균 증식에 미치는 콜레스테롤의 영향을 관찰하기 위한 실험을 한 결과 Dubos배지에 비해 콜레스테롤을 첨가한 Dubos배지에서 1주, 4주 관찰시 결핵균의 경우는 약1.5배, 2.1배, B.C.G.는 약1.5배, 1.8배, M. kansasii는 약1.6배, 1.8배, M. vaccae는 약1.3배, 1.6배, M. scrofulaceum은 약1.3배, 1.5배의 균증식양상이 계측되었다.

3. 콜레스테롤의 이용도에 있어서 우혈청알부민이 미치는 영향을 관찰한 바 KI기초배지 및 콜레스테롤 단독함유 KI배지와 우혈청알부민을 단독으로 함유한 KI배지에 비해 콜레스테롤과 우혈청알부민을 동시에 첨가한 배지에서 1주관찰시 결핵균의 경우는 약1.7배, B.C.G.는 약3배, M. vaccae는 약2배, M. kansasii는 약1.8배, M. scrofulaceum은 약1.6배의 균증식양상을 나타내었다.

이상의 결과로 미루어 보아 시험관내에서 배양이 가능한 각종 항산균의 배양에 있어서히알유론산 및 콜레스테롤은 항산균의 증식을 증가시키며 특히 콜레스테롤 첨가에 의한항산균의 증식은 우혈청알부민에 의하여 더욱 증가되는 것으로 사료된다.

[영문]

In Order to Compare the growth of various cultivable Mycobacteria in cholesterol or hyaluronic acid supplemented media with that in ordinary Dubos liquid medium, some species of Mycobacteria , including human pathogens and non-pathogens(M.

tuberculosis, B.C.G., M. vaccae, M. kansasii, M. scrofulaceum) were cultivated in three different media : Dubos liquid medium, KI-l medium containing 100 ㎍/ml cholesterol and 10 % sheep serum (Kato & Ishaque, 1978), and modified LA-3 medium containing 0.1 % hyaluronic acid and 1 % bovine serum albumin (Skinsnes, 1974). The cultivation of Mycobacteria in the three different media were compared by measurement of dry weight of bacterial growth. The effect of bovine serum albumin on cholesterol utilization by Mycobacteria were also examined by modifying the constituents of KI-l medium.

The results are summarized as follows :

1. All of above Mycobacteria examined in this study grew better in KI-1 medium than in others. This was especially true when bacterial growth in KI-1 medium was compared with that in Dubos medium : 4 and 3 fold increase in M. tuberculosis were observed in KI-1 medium within 4 to 6 weeks, 10 and 6 fold in B.C.G., 1.5 and 1.2 fold in M. vaccae, 2.4 and 2.1 fold in M. kansasii, and 5.2 and 3.5 fold in M. scrofulaceum.

2. The various Mycobacteria grew better in cholesterol supplemented Dubos medium than in ordinary Dubos medium: 1.5-2.1 fold increase bacterial growth in M. tuberculosis were observed in cholesterol supplemented Dubos medium compared with that in Dubos medium within 1-4 weeks, 1.5-1.8 fold in B.C.G., 1.6-1.8 fold in M. kansasii, 1.3-1.6 fold in M. vaccae, 1.3-1.5 fold in M. scrofulaceum.

3. In the requirement of the additional effects of bovine serum albumin on cholesterol supplemented medium, there was a 1.5-3 fold increases of bacterial growth in KI basal medium enriched by both cholesterol and bovine serum album in when compared with that in KI basal medium itself or enriched by cholesterol or bovine serum albumin alone.

Therefore, mycobacterial growth appeared to be increased by adding cholesterol or hyaluronic acid to the medium, especially, cholesterol with bovine serum albumin.