구강상피세포의 냉동보관 방법에 따른 세포생존률 비교

Abstract

[한글]

본 연구의 목적은 구강상피세포를 배양한 후 일반적인 세포 냉동 보존법, 저속 냉동 보존법, 급속 냉동 보존법, 2Mpa, 3Mpa의 압력을 이용한 저속 냉동 보존법으로 6일간 냉동 보존 시 각 냉동 보존법에 따른 세포의 활성도를 Cell counting, WST-1, Clonogenic capacity의 방법을 이용하여 비교 평가하기 위함이다. 구강 내 하악 치은에서 기원한 단층의 상피세포를 배양하여 6x106~7x106개의 세포가 확보되면 각각의 실험군당 1x106개의 세포를 다음의 방법으로 6일간 냉동 보존한다. 세포를 freezing container에 담아1℃/min 의 냉동속도로 -70℃까지 냉동 후 -196℃에 냉동하여 보관한 일반 냉동 보존군, 세포를 바로 -196℃의 액화질소에 넣어 냉동한 급속 냉동 보존군, 4℃에서 -35℃까지 -0.5℃/min 속도로 서서히 냉동시킨 뒤 -196℃에 냉동한 저속 냉동 보존군, 2MPa의 압력을 가하고 -0.5℃/min 속도로 4℃에서 -35℃까지 서서히 냉동시킨 뒤 -196℃에 냉동한 2MPa압력 저속 냉동 보존군, 3MPa의 압력을 가하고 -0.5℃/min 속도로 4℃에서 -35℃까지 서서히 냉동시킨 뒤 -196℃에 냉동한 3MPa압력 저속 냉동 보존군으로 나누었다. 보존액은 세포를 분양 받을 때와 같은 Media (10%FBS +90%RPMI)를 사용하였고 동해방지제로 5% DMSO를 사용하였다. 6일 후 냉동되었던 세포를 급속 해빙하여 각각의 Cell counting, WST-1, Clonogenic capacity 값을 측정하여 비교하였다. 1. Cell counting에서 일반 냉동 보존법, 2Mpa 압력 저속 냉동법, 3Mpa 압력 저속 냉동법이 저속 냉동법과 급속 냉동법에 비해 통계적으로 유의차 있게 높은 세포수를 나타내었다(p<0.05). 2Mpa 압력 저속 냉동법은 3Mpa 압력 저속 냉동법, 일반적인 냉동 보존법에 비해 높은 세포수를 나타냈으나 통계적인 유의차는 없었다.2. WST-1 검색에서는 2Mpa 압력 저속 냉동법이 저속 냉동법과 급속 냉동 법에 비해 통계적으로 유의차 있게 높은 흡광도를 나타내었다(p<0.05).2Mpa 압력 저속 냉동법은 3Mpa 압력 저속 냉동법, 일반적인 냉동 보존법에 비해 높은 흡광도를 나타냈으며3Mpa 압력 저속 냉동법, 일반적인 냉동 보존법이 저속 냉동법과 급속냉동법에 비해 높은 흡광도를 나타냈으나 통계 적인 유의차는 없었다.3. Clonogenic capacity에서는 2Mpa 압력 저속 냉동법이 저속 냉동법과 급속 냉동법에 비해 통계적으로 유의차 있게 높은 집락수를 나타내었다(p<0.05).2Mpa 압력 저속 냉동법은 3Mpa 압력 저속 냉동법, 일반적인 냉동 보존법에 비해 높은 집락수를 나타냈으며3Mpa 압력 저속 냉동법, 일반적인 냉동 보존법이 저속 냉동법과 급속냉동법에 비해 높은 집락수를 나타냈으나 통계 적인 유의차는 없었다.위의 결과를 통해 구강상피세포에서 2Mpa 혹은 3Mpa의 압력을 이용한 저속 냉동법이 저속 냉동법 및 급속 냉동법 보다 세포 활성도에 있어 우수한 경향을 나타냄을 알 수 있다. 자가 치아 이식을 위해서는 치주인대세포를 통한 연구가 필요하며 적절한 압력과 냉동속도에 대한 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다.

[영문]