A comparative histologic analysis of tissue- engineered bone using BMSCs, alveolar bone cells, and periosteal cells

Abstract

[한글]연구목적: 조직공학을 이용한 골 형성 방법에서 골세포의 종류에 따라 골 형성에 차이가 있는지를 평가하기 위하여 골수줄기세포, 치조골세포, 골막세포의 골형성 능력을 비교하고자 하였고 또한 세포운반체의 종류에 따른 차이가 있는지 평가하기 위하여 platelet?rich plasma (PRP)와 platelet?enriched fibrin glue의 골 형성효과를 비교하고자 하였다.방법: 성견에서 골수줄기세포, 치조골세포, 골막세포를 분리 배양하고 동일 성견의 혈액을 채취하여 platelet?enriched fibrin glue 와 PRP를 제조하였다. 배양한 골수줄기세포, 치조골세포, 골막세포를 각각 BMP?2 와 platelet?enriched fibrin glue과 혼합하여 9마리의 누드마우스를 3그룹으로 나누어 누드마우스의 등에 피하 주사하였고 대조군(3마리)에서는 세포 없이 BMP?2와 platelet?enriched fibrin glue를 혼합하여 주사하였다. 그리고 PRP와 platelet?enriched fibrin glue의 골 형성 효과를 비교하기 위하여 PRP에 골막세포와 BMP?2를 혼합하여 6마리의 누드마우스 등의 한쪽에 피하 주사하였고 등의 다른 쪽에는 platelet?enriched fibrin glue에 골막세포와 BMP?2를 혼합하여 피하 주사하였다. 주입 12주후 골 형성을 평가하였다.결과: 누드마우스 피하에 형성된 결절을 조직형태 계측학적 분석을 시행한 결과 골수줄기세포에서 29.9±5.2%, 치조골세포에서 42.9±4.3%, 골막세포에서 61.1±4.6%의 신생골이 형성되였고 PRP/골막세포/BMP?2 복합체를 주입한 군에서는 36±3%, platelet?enriched fibrin glue/골막세포/BMP?2 복합체를 주입한 군에서는 60±5.3%의 신생골이 형성되였다.결론: 골수줄기세포, 치조골세포 및 골막세포를 이용하여 조직공학 방법으로 골형성 능력을 비교해 볼 때 골막세포가 가장 효과적이였고, platelet?enriched fibrin glue 가 PRP 보다 더 우수하였다. 그러므로 본 연구에서는 조직공학을 이용하여 골형성을 높이기 위하여 골막세포의 이용과 platelet?enriched fibrin glue의 이용을 제안한다.

[영문]Objective: The aim of this study was to evaluate the osteogenic potential of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs), alveolar bone cells and periosteal cells in tissue-engineered bone formation, and to compare the effects of platelet-rich plasma (PRP) and platelet-enriched fibrin glue on bone formation in tissue engineering. Methods: BMSCs, alveolar bone cells and periosteal cells were isolated from dogs and expanded in vitro, and platelet-enriched fibrin glue and platelet rich plasma (PRP) were prepared using dog？s blood. 12 nude mice were used for comparing donor cell-related differences in a tissue-engineered bone. The cultured BMSCs, alveolar bone cells and periosteal cells were mixed with BMP-2 and platelet-enriched fibrin glue, and injected into the subcutaneous space on the dorsum of nude mice. On the control group, BMP-2 and platelet-enriched fibrin glue without cells were injected; In addition, 6 nude mice were used for comparing the effects of PRP and platelet-enriched fibrin glue on bone formation in bone tissue engineering. PRP was mixed with periosteal cells and BMP-2, and then the composites were injected into the subcutaneous space on the dorsum of nude mice (PRP sides). On the contralateral side of the dorsum, platelet-enriched fibrin glue/periosteal cells/BMP-2 composites were injected. The bone formation was evaluated after 12 weeks.Results: Histomorphometric analysis demonstrated that the subcutaneous nodules formed in nude mice contained 29.9% newly formed bone in the BMSCs, 42.9% newly formed bone in the alveolar bone cells, and 61.1% newly formed bone in the periosteal cells; in addition, it contained 26？}3% newly formed bone at the PRP/periosteal cells/BMP-2 sides and 61.1？}4.6% newly formed bone at the platelet-enriched fibrin glue/periosteal cells/BMP-2 sides.Conclusion: The periosteal cells can form bone the most effectively; the osteogenic characteristics of platelet-enriched fibrin glue are superior to PRP; and the periosteal cells combining with platelet-enriched fibrin glue are indicated to enhance bone formation in bone tissue engineering.