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Escherichia coli 세포에서 사람 유두종바이러스 16형 E6 DNA에서 유래된 단백질의 표현

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 Expression of the E6 protein of human papillomavirus type 16 in escherichia coli 
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[한글] 사람 유두종바이러스(Human papillomavirus, HPV) 16형은 여성 자궁 경부의 악성 종양과 밀접한 연관성이 있음이 보고되고 있으며, 형질 변환과 밀접한 관계가 있으리라고 생각되는 부위로서 HPV 16형의 E6, E7 open reading frame(ORF) 부위가 제시되고 있다. 본 연구에서는 암발생 기전에 있어 E6 ORP에서 유래된 단백질의 역할을 알아보기 위한 실험의 전 단계로서, E6 ORF를 E. coli에 subcloning하여 E6 단백질을 E. coli에서 표현시키고자 하였다. E6 ORF의 양 끝쪽에 대한 primer로 각각의 oligonucleotide를 합성하여 전체 HPV 16형 DNA로부터 polymerase chain reaction(PCR)을 이용하여 E6 ORF를 증폭한 다음 증폭된 DNA를 원핵세포 표현 벡터인 pGEMEX-1에 삽입하여 E. coli 세포를 transformation시켰다. Transformant로부터 E6 ORF가 subcloning된 것을 확인한 후, 확인된 E.coil 세포에서 T7 gene 10- E6 fusion단백질의 표현을 유도하였다. 표현 유도된 단백질의 확인을 위해 T7 gene 10 단백질을 토끼에 피하주사하여 T7 gene 10 단백질에 대한 항체를 제조하고, T7 gen e 10- E6 fusion 단백질의 표현을 Western blotting상에서 확인하였다.
[영문] Human papillomavirus type 16(HPV-16) has been known to be closely related to human malignant cervical lesions. E6 protein, the early region product of the genome of the human papillomavirs (HPV) has been shown to play an important role in the production of the transformed phenotype and oncogenesis probably by binding to the tumor suppressor protein. In the present study, the expression of T7 gene 10-E6 fusion protein in E. coli was attempted. Using synthetic 0ligonucleotides, sense and antisense primers of E6 ORF, E6 ORF was amplified by polymerase chain reaction(PCR). The amplified E6 ORF was 녀bcloned into E. co1i and the expression of T7 gene 10-E6 fusion protein was induced by isopropy1-thiogalactoside (IPTG). T7 gene 10-E6 fusion protein was identified by SDS-polyacryl amide gel electrophoresis and Western blot immunostaining with anti-T7 gene 10 antibody which has been prepared by immunizing a New Zealand White rabbit against T7 gene 10 protein.
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2. Thesis / Dissertation (학위논문) > 1. College of Medicine (의과대학) > Master's Degree (석사)
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