Effect of Platelet Rich Plasma on Ischemia-reperfusion Injury in Mice Flap Model

Abstract

허혈-재관류 손상은 피판의 실패와 장기 기능 부전의 주요 원인으로 이를 줄이기 위한 많은 연구가 진행되어 왔다. 활성화된 혈소판은 허혈 재관류 손상에서 혈전과 함께 내피세포의 손상을 일으키지만 체외에서 투여된 다량의 혈소판은 오히려 혈소판의 모임을 저하함이 심근 경색 모델에서 규명되었다. 본 연구의 목적은 쥐의 피판 모델에서 허혈-재관류 손상에 대해서 혈소판 농축 혈장의 영향을 규명하고 그 기전을 밝히는데 있다. 4개의 군을 무작위로 나누었으며 군별로 30마리의 마우스를 사용하였다. A군은 피판을 거상 후 아무 처치 없이 제자리에 봉합하였으며 B군은 혈소판 농축 혈장을 피판 봉합전 주입하였다. C군은 피판 거상 후 미세클램프를 이용하여 4시간의 허혈 후 재관류 손상을 주었으며 D군은 허혈-재관류 손상 후 혈소판 농축 혈장을 피판에 주입하였다. 피판 거상 1,3,7,10일 후 생존 면적과 혈류량을 측정하였다. 혈소판 농축 혈장이 피판의 생존 면적과 혈류량을 유의하게 증가 시켰으며 특히 허혈-재관류 손상이 있을 때 그 효과가 증대되었다. 피판의 생존부분을 채취하여 조직 샘플을 광학 현미경으로 관찰한 결과 혈소판 농축 혈장이 혈관 신생을 촉진시키며 또한 호중구의 모임과 혈전을 감소시켜 허혈-재관류 손상으로부터 조직을 보호하였다. 허혈 재관류 손상의 정도를 측정하기 위하여 재관류 12시간 후 조직에서 일산화 질소, 마이엘로퍼옥시다아제 (Myeloperoxidase), 말론디알데하이드 (Malondialdehyde), 과산화물제거효소 (Superoxide dismutase)를 측정하였다. 허혈-재관류 손상을 입은 군과 비교하였을 때 혈소판 농축 혈장은 일산화 질소, 마이엘로퍼옥시다아제, 말론디알데하이드 (Malondialdehyde)를 감소시키는 작용을 보였으며 과산화물제거효소는 증가가 확인되었다. 또한 전염증 사이토카인(proinflammatory cytokines)의 변화를 알기 위하여 실시간 중합효소 연쇄반응 (RT-PCR)응 이용하여 단핵세포 화학주성 단백질(monocyte chemotactic protein-1), 종양괴사인자 (tumor necrosis factor-α), 인터루킨 (IL-1β, IL-6)를 측정하였다. 혈소판 농축 혈장은 허혈-재관류 손상에 있어서 전염증사이토카인을 모두 감소시켜서 조직을 보호하는 효과를 보였다. 이러한 혈소판 농축 혈장의 작용은 세포사멸신호조절 카이네이즈(Apoptosis signaling regulating kinase 1)의 표현 저하와 연관이 있을 것으로 사료된다. 본 연구에서 혈소판 농축 혈장은 쥐의 피판 모델 허혈-재관류 손상을 감소시키며 조직을 보호하는 것으로 판명되었다. 이를 이용하여 임상에 적용함으로 보다 얻기 쉽고 저렴한 보호제로 이용될 수 있을 것이다.