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Naegleria fowleri에 대한 단세포군 항체의 생산과 그 특성에 관한 연구

Other Titles
 (A) study of the production and character of anti-Naegleria fowleri monoclonal antibodies 
Authors
 유재숙 
Issue Date
1989
Description
의학과/박사
Abstract

[영문] [한글] 자유생활 아메바인 Naegteria fowleri는 비강을 통해 인체에 들어와 출혈성 수막뇌염을 일으켜 감염된 사람의 대부분을 일주일 이내에 사망케 하는 원충이다. 이 기생충증의 진 단은 중추신경계통의 조직이나 뇌척수액으로부터 아메바를 검출하는 것인데 이 방법은 용 이하지 않다. 최근에 Kohlier 및 Milstein (1975)이 개발한 세포융합법을 이용하여 여러 기생충에 대 한 단세포군 항체를 만든 연구 보고가 많다. 이중 Leishmania spp. (Pratt 및 David, 198 1), Onchocerca volvulus (Des Moutis등, 1983), Trypanosoma cruzi (Lemesre등, 1986)및 Pneumocystis carinii(Kovacs등, 1986)등의 기생충에 대해서는 단세포군 항체에 효소, 형광물질 또는 방사능 물질을 부착시켜 환자의 혈청과 반응시킴으로서 기생충질환의 진단 및 분류에 이용되고 있다. 그러나 아직까지 N.fowleri에 대한 단세포군 항체의 생산과 이를 이용한 연구는 보고되어 있지 않다. 이에 본 실험에서는 N. fowleri에 특이한 단세 포군 항체를 만들어 이의 특성 및 그 이의 가능성을 알아보고자 하였다. 본 실험에서 얻은 결과는 다음과 같다. 1) N. fowleri로 면역시킨 마우스의 비장세포와 골수종 세포인 SP2/0를 융합하여 N.fow leri와 반응하는 7주의 단세포군 (Nf 1, Nf2, Nf256, Nf279, Nf27, Nf154, Nf137) 항체를 제조할 수 있었다. 2) 7주의 단세포군에서 생산되는 항체의 isotype은 IgG^^1이 2주(Nf27, Nf154), IgG^^3 가 1주(Nf 137), IgA가 4주(Nfl, Nf2, Nf25, Nf279)였다. 3) 7주의 단세포군 항체가 N. fowleri 이외의 다른 종류의 아메바와 교차반응하는지 그 여부를 관찰하기 위하여 효소표식 면역검사법을 실시하였다. Nf 256항체를 제외한 6주의 항체들은 N.fowleri에 특이한 항체였다. Nf 256항체는 실험에 사용된 모든종류의 아메바 와 반응하였으며, 특히 N. fowleri와 강하게 반응하였다. 4) 7주의 단세포군 항체가 N. fowleri의 세포막과 반응하는지를 알아보고자 간접 형광 학체법을 시행하였다. Nf 256항체를 제외한 6주의 단세포군 항체는 세포막의 일부에서 형 광이 관찰되었으며, Nf 256 항체는 형광이 관찰되지 않았다. 5) 단세포군 항체가 N. fowleri를 응집시키는지 알아보고자 Nf 256항체를 제외한 6주의 항체를 N.fowleri 영양형과 반응시켰더니 Nf27항체를 제외한 5주의 단세포군 항체에 의 해 응집이 일어남을 알 수 있었다. 6) 단세포군 항체가 N. fowleri 영양형의 중식에 미치는 영향을 알아보고자 Nf 256항체 를 제외한 6주의 항체와 보체로 N.fowleli 영양형을 처리한 후 CGVS배지에서 배양하였더 니 영양형의 중식이 억제되었다. 7) 단세포군 항채가 조직세포 (Chinesehamster ovary cell)에 의한 N.fowleri의 세포독 성에 미치는 영향을 알아보았더니 2주의 단세포군(Nf 2, Nf 154) 항체는 N.fowleri의 세 포독성을 저하시킴을 관찰할 수 있었다. 8) EITB (Enzyme-linked immunoelectrotransfer blot) 결과 Nf 279 항체는 N.fowleri 충체 항원중 25,000 dalton및 28,000 dalton, Nf 154 항체는 43,000 dalton _Nf 137항체 는 29,0OO dalton에 해당되는 분획에서 항원항체 반응을 나타냄을 알 수 있었다. 이상의 성적을 종합하면, N fowleri에 대한 7주의 IgG^^1, IgG^^3, IgA 단세포군 항체 를 생산하였다. 그중 Nf 256항체를 제외한 6주는 N. fowleri의 세포막 성분중 25,000∼43 ,000 dayton의 항원과 반응하는 항체로 다른 종류의 Naegleria spp.와 반응하지 않는 항 체임을 관찰할 수 있었다. 또한 이단 세포군 항체들은 영양형을 응집시키며, 시험관내에 서의 중식을 억제시키고 CHO 세포에 대한 N.fowleri의 세포독성을 저하시키는 성질을 가 지고 있음을 알 수 있었다. A Study of the Production and Charneter of Anti-Naegleria fowleri Monoclonal Antibodies Jae-Sook Ryu Department of Medical science The Graduate School, Yonsei University (Directed by Professor Kyung-Il Im, M.D.) Naeglera fowleri, a pathogenic free-living amoeba commonly found in moist sail and fresh water, enters the body via the nasal mucosae and migrates along the olfactory nerves to the brain, where it causes acute meningoencephalitis The diauosis of this protozoan inflection has been accomplished only upon postmortem examination, by detecting the causative protozoa. However, the species identification of this protozoa is still not easy because the toxonomical criteria to differentiate the morphological characteristics among species have net yet been fully established. Recently, many investigators haute developed the monclonal antibodies against various parasites such as Leishmania sp., Onchocerca volvulus, Trypanosoma cruzi, Pneumocystis carinii and have demonstrated the immunodiagnostic potential of monoclonal antibodies This study baa attempted to produce the monoclonal antibody specific far N. fowleri and to provide information about its characteristics and capability for taxonomy. Cell fusion for the production of the monoclonal antibody was performed using the N, fowleri trophozoites by the methods of Galore et al. (1977), Kohler et al (1976). and Littlefield (1974). 1) The seven clones secreting monoclonal antibodies were produced. 2) The isotypes of the 7 monoclonal antibodies produced were IgG^^1 (Nf 27, Nf 154), IgG^^3, (Nf 137), IgA (Nf 1, Nf 2, Nf 256, Nf 279). 3) The Nf 256 demonstrated positive reaction nonspecifically with other free-living amoebae such as N. gruberi, N. jadini, Acanthamoeba culbertsoni, and A. royreba by the ELISA method. The other monoclonal antibodies, except Nf 256, reacted with N. fowleri specifically although Nf 1 reacted with N. jadini and A.royeba weakly. 4) The antigens recognized by the monoclonal antibodies (except Nf 256) proved to be present on the surface membrane of N. fowleri, which was demonstrated by indirect immunofluorescent assay. Nf 256 failed to react with the surface membrane of live trophozoites of the amoeba. 5) Five monoclonal antibodies (Nf 1, Nf 2, Nf 279, Nf 154 and Nf 137) could lead to the agglutination of N. fowleri trophozoites. 6) Six monoclonal antibodies and complement could inhabit proliferation of N.fowleri trophozoites, and monoclonal antibody Nf 2especially reduced the growth of the amoeba. 7) The cytotoxicity on CHO cells by N. fowleri trophozoites greatly decreased when monoclonal antibodies Nf 2 and Nf 154 added. 8) Apparent molecular weights of the antigens corresponding to the three reactive monoclonal antlbodies, such as Nf 279, Nf 154 and Nf 137, were 28,000 (25,000), 43,000 and 29,000 dalton. The above results reveal that seven cell lines were produced successfully which secrete anti-Naegleria fowleri monoclonal antibodies. Among them, monoclonal antibody Nf 2 reacted with the surface membrane of N. fowleri trophozoite, inhibited the in vitro growth of the amoeba and reduced cytotoxicity on the CHO cells by the amoeba.
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