단세포 군항체를 이용한 이질아메바 항원의 분석

Abstract

이질아메바 한국분리주 YS-27의 특성과 병원성에 관련되는 성분을 밝혀내기 위해 단세

포군항체를 이용하여 이질아메바의 항원을 분석하였다.

이질아메바(YS-27)의 조항원을 전기영동한 결과 주요 항원대는 97.4kDa,45kDa,35∼38kD

a, 25∼31kDa, 14.4kDa 등에서 관찰되었다. 세포융합결과 얻은 2개의 단세포군항체(EhA-1

6, EhA-34)와 반응하는 항원성분의 분자량은 각각 96kDa과 14.4kDa으로 확인되었다. 그리

고 이 단세포군항체와 반응하는 항원의 성분은 열에 대해 비교적 안정된 단백질임을 알수

있었다. Two-site ELISA를 실시한 결과 얻어진 단세포군항체와 반응하는 항원분자에는

반복되는 항원결정기가 없음을 알 수 있었다.

FPLC를 이용하여 나눈 이질아메바의 항원분획을 단세포군항체와 반응시키자 단세포군항

체는 모두 먼저 여과되어 나온 분획들과 강한 반응을 나타내었다. 반면 각 분획들을 이질

아메바증 환자들의 혈청과 반응시킨 결과에서는 단세포군항체의 경우와는 달리 특정분획

에서 강한 반응을 나타내기 보다는 일부 분획을 제외한 나머지 분획에서 비교적 고르게

반응하는 양상을 보여주었다.

간접형광항체법을 이용하여 단세포군항체와 반응하는 항원 성분이 이질아메바에서 분포

하는 위치를 확인하였다. 그 결과 EhA-16와 반응하는 항원성분은 이질아메바의 막 전체에

걸쳐 분포하고, EhA-34와 반응하는 항원 성분은 막의 한쪽 부위에 한정되어 분포하는 사

실을 확인할 수 있었다. 이들 항체는 다른 종류의 병원성 원충들(Trichomonas vasinalis,

Acanthamoeba culbertsoni, Giardia lamblia)에 대해서는 반응을 나타내지 않아 이들 항

체와 반응하는 성분들은 이질아메바의 특이성분으로 생각되었다. 그리고 단세포군항체와

반응하는 항원성분은 이질아메바가 표적세포에 부착하는 데 관여한다는 사실을 알 수 있

었다.

Analysis of Entamoeba histolytica antigen using monoclonal antigen

In-sok Yeo

Department of Medicine The Graduate School Yonsei University

Directed by Professor kyung-il Im)

An analysis of antigenic components of Entamoeba histolytica was performed using

the monoclomal antibodies made against the Korean strain YS-27.

The SDS-PAGE showed the molecular weights of the major antigenic component of

YS-27 were 97.4kDa, 45kDa, 35∼38kDa, 25∼31kDa and 14.4kDa. The antigenic

components reacted to two monoclonal antibodies(EhA-16, EhA-34) were of 96kDa and

14.4kDa molecules. And the antigenic components reacted to the monclonal antibodies

proved to be heat-stable proteins by the treatment of trypsin, heat and sodium

periodate. Two-site ELISA cued the absence of repeated epitopes which reacted to

these monoclonal antibodies.

Indirect immunofluorescence studies visualized the distribution of antigenic

components reacted to EhA-16 and EhA-34. EhA-16 attached to the whole surface of

Entamoeba histolytica and EhA-34 to the restricted areas of membrane surface and

cytoplasm. The components reacted to EhA-34 are presumed to have some functions

related to amebic movements. Besides, these monoclonal antibodies inhibited the

attachment of Entamoeba histolytica to RBC.

Seven peaks were observed at the elution profile of Entamoeba histolytica YS-27

on a FPLC and the first two fractions skewed strong reactions to the monoclonal

antibodies. This finding strongly suggests the presence of antigenic components in

the first-separated fractions which may be of help to immunodiagnosis and

immunoprophylaxis against amebiasis.