질트리코모나스(trichomonas vaginalis)의 세포 독성에 관한 연구

Abstract

[영문]

[한글]

질트리코모나스(Trichomonas vaginalis)는 동일환자에 있어서도 환자의 상태에 따라 무

증세를 보이거나 심한 소양감 또는 대하의 증가 등의 증세를 나타내는 등 그 증세가 다양

하기 때문에, 실험실내에서 본 원충의 주(株)에 따른 병원성을 판별하려는 시도가 계속되

고 있다. 즉 실험동물을 이용하는 방법, 충체의 크기에 따른 병원성의 구분, isoenzyme의

주행양상에 따른 차이 등의 방법이 시도되고 있고, 근래에는 본 원충이 일부 조직배양

세포를 파괴시키는 것이 관찰되어, 조직배양세포에 대한 질트리코모나스의 세포독성의 차

이를 이용하여 본 원충의 병원성 감별이 가능할 것임이 시사되고 있다.

이에 본 연구는 질트리코모나스의 병원성 감별을 위하여 트리코모나스질염 환자로부터

분리한 질트리코모나스를 무균배양하여 HeLa세포, HEp-2세포 및 Vero세포에 대한 세포독

성의 차이를 알아보고 종래에 주로 이용되어온 마우스 피하농양 크기에 따른 병원성 감별

법과. phospho-glucomutase, glucose phosphate isomerase, hexokinase, malic enzyme등

의 isoenzyme주행양상과 상호비교하여, 조직세포에 대한 세포독성의 차이로 병원성을 감

별할 수 있는 가능성과 질트리코모나스의 병원성 판별에 유용한 조직세포를 알아보았다.

트리코모나스 질염환자로 부터 분리하여 무균배양에 성공한 질트리코모나스 12개 분리

주를 실험에 사용하였으며, 마우스 피하농양 형성실험을 위하여 질트리코모나스주입 6일

후에 농양의 평균면적을 측정하였고, 조직배양세포에 대한 세포독성의 정도는 살아있는

조직세포를 crystal violet로 염색한 후 용해시켜 ELISA판독기로 570nm에서 흡광도를 측

정하여 정상 조직세포에 대한 백분률로 산정하였다. Isoenzyme의 주행양상은 15% starch

gel전기영동법으로 관찰하였으며, 이상의 실험결과 다음과 같은 결론을 얻었다.

1. 조직배양세포의 수를 판별하기 위한 trypan blue dye exclusion법과 crystal violet

염색법은 상호 상관성이 있었다(r=0.96).

2. 조직배양세포에 질트리코모나스를 접촉시킬 때, 원충의 수가 많을수록, 접촉시간이

길수록 사멸되는 조직세포수가 증가하였다.

3. 질트리코모나스에 의한 세포독성은 HEp-2세포, HeLa세포, Vero세포의 순으로 강하게

나타났다.

4. 질트리코모나스의 각 분리주별로 질트리코모나스의 수를 HeLa세포수의 1/2배, HEp-2

세포수의 1/4배, Vero세포수의 5배씩을 넣어 12시간 접촉시킬 때 세포독성의 차이를 판별

하기가 용이하였다.

5. HeLa세포에 대한 질트리코모나스의 세포독성과 마우스의 피하농양 면적의 크기에 따

른 병원성과는 12개 분리주중 7개 분리주에서 일치하였다.

6. 질트리코모나스의 병원성 감별에 있어 HeLa세포수와 질트리코모나스수의 비를 2 : 1

로하여 12시간 incutation한 후 세포독성이 80%이상인 주는 강독성, 40∼80%인 주는 중등

독성, 40%미만인 주는 약독성으로 간주할 수 있었다.

이상의 결과로 보아 HeLa세포에 대한 질트리코모나스의 세포독성의 차이를 이용하여 질

트리코모나스 분리주에 따른 병원성 감별에 이용이 가능할 것으로 생각된다.

Cytotoxicity of Trichomonas vaginalis to the Monolayers of Tissue Cell Lines

Duck-Whan Kim

Department of Medical Science The Graduate School, Yonsei University

(Directed by Prof. Keun-Tae Lee, M.D., D.M, Sc)

A total of 12 isolates of Trichomonas vaginalis was collected from the

trichomoniasis patients and axenically cultivated in Diamond's TPS-1 medium. The

cytotoxicity of these isolates to the HeLa, HEp-2 and Vero cell lines was measured

by the crystal violet staining method. On the other hand, these results were

compared with the results of 6-day lesions of mice tissues. Starch-gel

electrophoretic isoenzyme patterns were observed in 12 trichomonad isolates.

The results obtained in this study are summarized as follow:

1. Crystal violet absorbance test for the living HeLa cells was well correlated

with the number of living cells counted br trypan blue dye exclusion

method(γ=0.96).

2. In the cases that the number of trichomonad isolates and incubation time were

increased in the target cell lines, the earlier destruction of the cell monolayers

was observed.

3. Cytotoxicity of T. vaginalis to HEp-2 cell was relativeiy greater than to HeLa

and Vero cell lines.

4. Optimal exposure ratios of parasite to cell monolayers for distingushing their

cytotoxicity, were 1:2 in HeLa cell, 1 :4 in HEp-2 cell, and 5:1 in Vero cell

lines, respectively.

5. Cytotoxicity of 7 isolates of T. vaginalis among 12 isolatest was well related

with the pathogenicity to mice.

6. When the parasite to HeLa cell ratio was 1:2 and incubated for 12 hours,

highly pathogenic isolates showed over 80% of cytotoxicity, mild pathogenic group

showed 40 to 80% of cytotoxicity, and low pathogenic group showed 1ower than 40%.

These results suggest that in vitro cytotoxicity teat of T. vaginalis to HeLa

cell would be a useful tool to distinguish the pathogenic isolates of T. vaginalis.