MTT 검색법을 이용한 쥐 치아 치주인대세포의 활성도 평가

Abstract

[한글]

성공적인 치아 재식을 위해서는 치유에 필수적인 치근면의 치주인대세포 활성도를 유지하기 위하여 가능한 빠른 시간 내에 재식 하거나, 그렇지 못할 경우 재식 전까지 치주인대세포의 활성도를 유지할 수 있는 적절한 보관용액에 보관하여야 한다. 치아 보관 용액의 치주인대세포 활성도 유지능력을 평가하기 위해서는 치근면에 부착되어 있는 치주인대세포의 활성도를 직접 측정하는 것이 가장 이상적이나 아직까지 그러한 방법이 보고된 바는 없다.

본 연구는 첫째, MTT 검색법이 쥐 치아 모델에서 치주인대세포의 활성도를 측정하는데 유용한지 여부와둘째, 여러 가지 치아보관용액(Hank’s balanced salt solution(HBSS), Dulbecco’s modified eagle medium(DMEM), Viaspanⓡ과 Likorol ⓡ) 을 이용하여 1시간, 24시간, 1주일 동안 발거 된 쥐 치아를 보관하였을 때 치주인대세포의 활성도를 비교하기 위하여 시행되었다.

암컷 Sprague-Dawley계 흰쥐 75마리를 이용하여 β-APN 전 처치 후 상악 제1대구치를 발치하여 즉시 혹은 1시간 건조 시키거나 Viaspanⓡ;에 보관 후 재식 하여 2주뒤 희생시켜 치근의 흡수정도를 관찰하고같은 방법으로 발치 된 치아를 처리하여 치아자체를 MTT solution에 담구어 MTT 검색을 시행하였다.

조직학적 관찰 결과와 MTT 측정치의 결과를 비교하였을 때 MTT 검색법이 조직학적 평가와 일치하여 치주인대세포의 활성도 평가에 유용한 방법이 될 수 있음을 알 수 있었다.

여러 가지 치아보관용액의 MTT 검색 결과 1시간과 1일 보관한 경우 보관용액에 따른 세포 활성도에는 차이가 나지 않았다. 1주일 보관한 경우 Viaspan에 보관하였을 때 다른 보관용액에 비해 현저하게 세포

활성도가 높았으며 이는 통계학적으로 유의할 만한 수준이었다(p< 0.05). 그 다음으로 HBSS, Likorolⓡ,DMEM 순으로 세포활성도가 높게 나타났다.

본 연구에서는 쥐 치아의 치아 표면에서 직접 치주인대세포의 활성도 평가 방법을 제시하고 몇 가지 보관용액에 대한 자료를 제시함으로써 보다 오랫동안 세포 활성도를 유지할 수 있는 보관용액 개발 혹은보관 방법 개발에 기초 자료가 될 수 있을 것이다.

[영문]

Periodontal ligament cell viability is critical for periodontal healing of replanted and

transplanted teeth. It would be ideal if the viability of periodontal ligament cell can be measured directly from the root surface, however, it has not yet been reported.The purpose of this study was first to verify the MTT assay as a tool of measurement of the periodontal ligament cell viability from the extracted rat molar teeth compared with the histological observation and secondly to evaluate the viability of the periodontal ligament cells when stored in four different storage media, Hanks balanced salt solution (HBSS), Dulbecco’s modified eagle medium (DMEM), Viaspanⓡ; and Likoroⓡl.

A total of 75 Sprague-Dawley white female rats of 4-weeks old with a body weight of about 100 grams were used. The maxillary left and right, first and second molars were extracted as atraumatically as possible under ketamineⓡ; anesthesia. Ten teeth of each group (Immediated treated, I-hour dried and 1-hour Viaspanⓡ; treated) were immersed in 200ul of MTT solution(0.5mg/ml) in each well of 96-well plate.

Another 10 teeth of each group were treated as same as above and replanted to the original socket of experimental animals. After 2 weeks, the animals were sacrificed and histological slide were

constructed and the resorption points were recorded.

For evaluation of storage media, 10 teeth each were immersed in 2 ml of Hank’s Balanced Salt Solution (HBSS), Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) with 1% penicillin and streptomycin,

Viaspanⓡ, Likoroⓡ for 1hour, 24hours and 1week at 4oC. After the designated storage period in the media, the teeth were placed in the 96-well plate and MTT assay was done.

The results, which the MTT measurements were consistent with histologic observation, suggested that the MTT assay could be a good method to evaluate the viability of periodontal ligament cell from the extracted root surface.

In the MTT measurements after 1 hour and 24 hours storage, there were no differences among the experimental groups. After one-week storage period, Viaspanⓡ group showed significantly higher

viability of periodontal ligament cell compared with the other media (p<0.05)