갑상선 수질암 조직에서 RET 원암유전자의 돌연변이 양상

Abstract

[한글]

갑상선 수질암은 조직학적으로 parafollicular C-cell에서 기원하여 칼시토닌을 생성하며, 다양한 임상 양상으로 발현된다. 특히, 수질암 중 약 20%는 상염색체 우성의 유전 성향을 보이고 주로 MEN (multiple endocrine neoplasia)의 형태로 나타나는 유전형 (hereditary form) 인데, 그 발생기전이 여러 종류의 RET 원암유전자 (proto-oncogene) 의 germ-line mutation 으로 밝혀졌으며, 일부 산발형 (sporadic form) 에서도 RET 원암유전자의 somatic mutation이 밝혀진 바 있다. 이미 미국, 유럽, 일본 등의 선진국에서는 환자의 혈액검체를 이용한 RET 원암유전자에 대한 유전학적 검사 (genetic screening) 가 갑

상선 수질암의 보편화된 진단 과정이 되었음은 물론, 이를 치료에 이용하는 단계에 와 있으나, 국내에서는 발생빈도가 매우 낮고 유전형이 극히 적어 RET 원암유전자에 대한 유전학적 연구는 극히 드물고 단편적이었다. 이에 본 연구자는 갑상선 수질암의 RET 원암유전자에 대한 유전학적 검사의 기초자료로서 또한 국내 갑상선 수질암 발생의 유전학적 배경을 알아보고자 본 연구를 시행하였다.

갑상선 수질암으로 수술적 치료를 받은 예 중에서 보관상태가 양호한 20예의 병소 및 인접 정상조직이 포함된 파라핀에 포매된 조직을 대상으로 RET 단클론 항체를 이용한 면역조직화학염색과 산발형에서 돌연변이의 빈도가 높은 것으로 보고된 exon 13과 exon 16에

대한 직접적 DNA 염기배열 분석을 시행하여 RET 암단백 (oncoprotein) 수준에서의 발현양상과 RET 원암유전자의 돌연변이 여부를 알아보았으며, 돌연변이에 따른 임상병리적 악성도와 RET 항체에 대한 면역조직화학적 발현도의 상관관계를 알아보았다. 실험 결과는 다

음과 같다.

1. 면역조직화학염색에 대한 양성반응 영역백분율은 66.0 ±40.1 % 로 높은 발현도를 보였다.

2. 5예 (25.0%) 에서 돌연변이가 발견되었는데, RET exon 13에 대한 DNA 염기배열분석 상 Codon 767, Codon 768 에서 각각 1 예씩, Codon 778에서 2예로 총 4예에서 mis-sense mutation이 발견되었다. RET exon 16에 대한 분석결과상에서는 1예에서 Codon 926에서의 silent mutation (ACG-ACT) 이 발견되었다.

3. RET 원암유전자 돌연변이에 따른 TNM 병기, 지속적 고칼시토닌혈증 빈도, 재발여부, RET 항체에 대한 면역조직화학적 발현도는 모두 통계학적으로 유의한 차이가 없었다 (p>0.05).

결론적으로 비록 본 연구가 파라핀에 포매된 조직을 이용하였고, 전체적인 DNA 염기배열분석이 아닌 단지 exon 13과 exon 16에 대한 연구이기에 그 한계성은 있었지만 갑상선 수질암 조직의 RET 암단백 (oncoprotein) 수준에서 높은 발현도와 5 예 (25.0%)에서의 RET 원암유전자 돌연변이의 존재를 확인함으로써 국내 갑상선 수질암의 발생과정에도 RET 원암유전자의 유전학적 연관성을 추측할 수 있었으며, 유전학적 검사를 통한 조기 진단 및 효율성 있는 치료를 시행할 수 있는 근거를 제시할 수 있을 것으로 생각된다.

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핵심 되는 말 : 갑상선 수질암, RET 원암유전자, 면역조직화학염색법, DNA 염기배열 분석

[영문]

The molecular pathogenesis of hereditary medullary thyroid carcinoma is well known to be associated with germ-line mutation in the RET proto-oncogene and sporadic medullary thyroid carcinoma has been shown to carry somatic RET mutation especially in exon 13 and 16. The aim of this study is to evaluate the genetic background in the pathogenesis of the sporadic medullary thyroid carcinoma which shows extremly high incidence in Korea.

Direct DNA sequencing for RET exon 13 and 16, as well as immunohistochemistrical assay for a monoclonal RET antibody were performed from 20 cases of archival tissues of medullary thyroid carcinoma.

Monoclonal RET antibody with C-terminal epitope showed comparatively stronger expression in tumor cells than in normal tissues and immunoreactive area in the tumor was 66.0 ±40.1 %. Direct sequencing of RET exon 13 revealed 4 cases of mis-sense mutations in Codon 778, Codon 767, and both in Codon 768 and 778. One case showed a silent mutation (ACG-ACT) in RET exon 16 (Codon 926).

The strong RET immunoreactivity of medullary thyroid carcinoma may suggest that there could be a genetic alteration in oncoprotein level. RET proto-oncogene mutation may be involved in the evolutional process of medullary thyroid carcinoma

in the aspect of molecular basis.