3'-Me DAB로 유도된 간장암에서 immunoaffinity column을 이용한 세포표면 종양 특이 항원 분리

Abstract

[한글]

f 정상 세포가 암세포로 변형되는 과정에서 새로운 단백질이 표현된다는 사실은 많이 아

려져 있으나, 화학 발암제 및 방사선에 의하여 유발되는 종양이나 자연 발생되는 종양에

서 특이하게 나타나는 항원 중에 서로 공통되는 항원이 존재한다는 보고가 나오고 있다.

이러한 종양 공통 특이 항원의 발견은 임상적 이용도가 높을 뿐 아니라 종양의 발생 기전

을 이해하는데 도움이 되리라 사료된다. 이에 본인은 3'-methyl-4-dimethylaminoazobenze

ne(3'-Me DAB)으로 유도되는 백서 간장암에서 종양 공통 특이 항원이 발견된다는 Kim등(1

985)의 보고에 따라 3'-Me DAB로 유도 되는 백서 간장암에서 종양 공통 특히 항원을 immu

noaffinity column을 이용하여 규명하고 분리 정제하려고 본 실험에 착수하여 다음과 같

은 결론을 얻었다.

3'-Me DAB가 0.06%함유되어있는 합성식이로서 24주 이내에 모든 백서에서 간장암이 유

발되었으며, 세포 원형질막 표면 단백질은 3M KCl로 추출하여 백서 정상 간장과 간장암

세포의 원형질막 표면 단백질을 SDS-PAGE로 분석하여 본 결과 분자량이 66,000 및 73,000

의 단백질이 간장 세포 원형질막 표면에서 새로이 나타남을 볼 수 있었다. 백서 간장암

세포 원형질막 표면 단백질에 대한 토끼의 항혈청을 얻었으며, 이 항혈청에 백서 정상 간

장 세포 원형질막 표면 단백질을 과량 첨가하고 침전물을 제거함으로서 흡수항혈청을 제

조하였다. 이 흡수항혈청은 immunoelectrophoresis상에서 백서 정상 간장 세포 원형질막

표면 단백질과는 반응하지 않고 백서 간장암 세포 원형질막 표면 단백질과 반응하여 침전

대를 형성하였다. 이것으로 흡수항혈청이 간장암 특이 세포 원형질막 표면 항원에만 반응

함을 확인할 수 있었다. 이 흡수항혈청에서 Protein A-Sepharose 6MB column을 이용하여

IgG를 분리한 후, CNBr-activated Sepharose 4B에 결합시켜 간장암 특히 세포 원형 질막

표면 항원에 친화력을 가지는 immunoaffinity column을 제조하였다. Immunoaffinity colu

mn을 사용하여 백서 간장암 세포 원형질막 표면 단백질 중에서 간장암 특히 항원을 분리

하여 SDS-PAGE를 시행해 본 결과 분자량 66,000 및 73,000인 단백질이 주를 이루고 있었

으며, 이러한 사실은 간장암과 정상간장의 세포 원형질막 표면 단백질의 SDS-PAGE상에서

관찰되는 양상과 일치하는 결과였으며 Kim등(1985)이 보고한 바와도 일치하였다. 분자량

66,000 및 73,000의 단백질은 DEAE Sephadex A-50 ion exchange chromatography로서 순수

분리할 수 있었다.

이상과 같은 실험결과로서 분자량이 66,000과 73,000인 단백질이 백서 간장암 세포 원

형질막 표면에 새로이 나타나며, 이러한 단백질은 흡수항혈청에서 분리된 IgG로 제조한 i

mmunoaffinity column을 이용하여 신속히 많은 양을 분리해 낼 수 있었다.

[영문]

There have been several reports on the existence of common antigens among antigens assoicated with tumors induced by chemical carcinogens of radiation and naturally occurring tumors. The tumor associated common antigenes could be useful clinically and for understanding the carcinogenesis. The present study was

therefore undertaken in order to confirm the 3'-Me DAB-induced common tumor associated antigens reported by Kim et al. (1985) and purify them by immunoaffinity column chromatography, and obtained the following resultss.

Liver tumor was induced in rats within 24 weeks of feeding synthetic diet containing 0.06% 3'-Me Dab. The plasma membrane surface proteins of normal rat liver and hepatoma cells were extracted with 3M KCl and analyzed b SDS-PAGE, which showed the new proteins with molecular weights of 66,000 and 73,000 among surface proteins of rat hepatoma. The rabbit antiserum was obtained using plasma membrane surface proteins of hepatoma and precipitated with normal plasma membrane surface proteins to prepare absorbed antiserum. The absorbed antiserum was shown to be specific for surface proteins of rat hepatoma by immunoelectrophoresis. The IgG was then separated from the absorbed antiserum by affinity chromatography using Protein A-Sepharose 6MB and coupled to CNBr-activiated Sepharose 4B. The immunoaffinity column(IgG-CN_Sepharose 4B) was used to separate the hepatoma-specific cell plasma membrane surface proteins, of which the proteins with molecular weights of 66,000 and 73,000, respectively, were then purified by DEAE Sephadex A-50 ion exchange chromatography to homogeneity as shown by SDS-PAGE. This result provides a simple and quick method for purification and separation of tumor associated antigens.