질트리코모나스(trichomonas vaginalis)감염의 면역학적 진단법에 관한 비교 연구

Abstract

[한글]

질트리코모나스 감염의 진단을 위하여 질분비액의 직접도말검사(McCann, 1974)나, 직접도말 표본의 Papanicolau염색 (Hushes et al., 1966), Giemsa염색 (Freeman, 1958), Roma

nowsky염색 (Lowe, 1972), acridine orange염색 (Dart and Turner, 1959)등이 이용되고 있으나 배양법에 비해 검출률이 낮은 것으로 알려지고 있다(Sepence et al., 1980). Enzyme-linked immunosorbent assay(EL1SA)는 이질아메바증(Voller et al., 1976a). 톡소플라스마증(Voller et al.,1976b), 람블편모충증(Kim et al., 1982) 진단에 가치가 있으며, 방법이 간편한 thin layer immunoassay(TIA)도 이질아메바증(Nilsson et al., 1980b), 간흡충증(f7, 1983)에 감수성이 높은 것으로 알려져 있다.

질트리코모나스 감염시 특히 남성의 경우 진단이 용이하지 않아, 면역학적 진단방법이 요구되고 있다. 본 연구는 질트리코모나스 감염환자에서 분리하여 배양된 질트리코모나스를 항원으로,ELISA, 간접형광항체법 및 TIA를 시행하여 환자의 혈청내에서 항체를 검출하

고 이들 면역학적 진단법이 본 원충 감염진단에 이용될 수 있는지 여부를 알아보고자 하였다.

무균배양한 질트리코모나스를 항원으로 사용하여 polystyrene microplate에 부착시키고 시험혈청과 반응시킨 후 여기에 peroxidase conjugated antihuman IgG(Cappel Lab.)를 반응시켰다. Peroxidase의 기질로 ortho-phenylenediamine과 H^^2 O^^2를 사용하여 ELISA를 시행하였다. 이때 conjugate의 적정 희석도는 1 : 10,000, 항원의 적정 희석도는 1 : 2,000, 시험혈청의 적정 희석도는 1 : 200이었다.

이 결과 트리코모나스 질염환자의 ELISA치 (0.84±0.07)는 건강대조군(0.26±0.01), candida감염군(0.38±0.03), 람블편모충 감염군(0.14±0.02), 이질아메바 감염군(0.14±0.02), 톡소플라스마 감염군(0.10±0.01)에 비해 그 차이가 유의하였다(P<0.701).

또한 배양된 질트리코모나스를 10% formaldehyde로 고정하여 만든 항원을 사용하여 간접형광항체법을 시행하였으며 이 면역진단법에 의한 항체가에 있어서도 질트리코모나스 감염군의항체가(48.4±5.21)는 건강대조군(0.5±0.20), candida감염군(2.4±0.77), 람블편모충 감염군(2.4±0.01), 이질아메바 감염군, 톡소플라스마 감염군에 비해 그 차이가

유의하였다(P<0.001).

TIA에 의한 물방을 면적의 크기에 있어 질트리코모나스 감염군(4.1±0.14)은 건강대조군(2.7±0.45)에 비해 유의한 차이가 관찰되었다(0.005＜P＜0.01).

질트리코모나스에 감염된 환자를 대상으로 시행한 ELISA와 간접형광항체법에 의한 항체가 분포는 서로 상관성이 있었으며, 상관계수는 r=0.79이고 희귀방정식은 Y=0.033+0.Ol7X였다.

이상의 결과로 보아 이들 면역진단법들은 질트리코모나스 감염에 있어 진단적 가치가 있다고 사려된다.

[영문]

The diagnosis of Trichomonas vaginalis infection has been depended upon the microscopic demonstrations of the protozoa in wet smears(McCann, 1974), in stained smears(Hughes et al., 1996; Freeman, 1958';Lowe, 1972; dart and Turner, 1959), or in culture media(Mclellan et al., 1982). However, the diagnostic effectiveness of these methods is variable according to both the types of specimen taken and the processing of the specimen. immunodiagnostic tests therefore seem to be necessary for the diagnosis of trichomoniasis cases.

This study is aimed to compare the diagnostic efficacy of enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), indirect immunofluorescent antibody test(IFAT) and thin-layer immunoassay(TIA) in trichomoniasis.

Each strain of T. vaginalis, isolated from the patients, was cultured axenically in the modified Diamond's TPS-1 media. For the performance of IFAT, the trophozoites were smeared for preparing the antigen slides. The fluorescent antibody titers in 67 sera specimens obtained from the trophozoitsis cases were

significantly higher than those from 57 healthy controls, 54 candidiasis, 10 amoebiasis, 10 giardiasis and 10 toxoplasmosis patients(p<0.001).

T. vaginalis trophozoits were disrupted by an ultrasonicator, and the supernatant after centrifugation was used as antigen for the ELISA and TIA.

Peroxidase-conjugated anti-human IgG(Cappel), orthophenylene diamine and H^^2 O^^2 as substrate were used for ELISA. Anti-trichomonal antibody levels in the sera of the trichomoniasis patients were significantly elevated comparing with those in the

healthy control group, candidiasis, giardiasis, amoebiasis and toxoplasmosis cases(p<0.001).

The zone diameters in TIA were significantly wider in 36 trichomoniasis cases than those in 29 healthy controls(0.005＜p＜0.01), but not different as compared with

those of 28 candidiasis cases(0.2＜p＜0.1).

A comparison of three different immunodiagnostic tests for the detection of anti-trichomonal antibody was made. Significant correlation between the antibody titers of trichomoniasis cases detected by ELISA and IFAT was noted in this study.

The correlation coefficient was 0.79, and the regression equation was Y=0.033+0.017X

It is suggested that IFAT and ELISA could be useful tools for the diagnosis of trichomoniasis and the TIA might supplement or be used as an alternative to other immunodiagnostic tests.