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Metallothionein 발현이 NF-kB 활성에 미치는 영향

Other Titles
 Effect of metallothionein expression on NF-kB activity 
Issue Date
2000
Description
의학과/박사
Abstract
[한글] Metallothionein(MT)은 금속이온과 결합하거나 또는 결합되어 있던 금속이온을 유리하여 세포내 금속 항상성을 조절하는 저분자 단백이다. 최근 전사인자인 nuclear factor kappa B (NF-kB) 활성이 금속이온의 세포 내 농도변화에 영향을 받는 것이 알려졌다. 특히, 소 뇌혈관 내피세포에서 아연이온은 NF-kB 활성을 강력하게 억제하는 것으로 보고되었다. 따라서, 본 연구에서는 MT의 발현이 아연이온에 의한 NF-kB 활성조절에 영향을 미치는 요소로 작용하는지를 알아보고자 하였다. 우선, Tet-On HeLa 세포주에서 아연이온은 농도 의존적으로 NF-kB 활성을 억제함을 젤 지연 분석법을 통해 확인하였다. 아연 ionophore인 pyrrolidine dithiocarbamate(PDTC)와 pyrithione은 NF-kB 활성을 억제하였고, 이는 Cu-EDTA에 의해서는 억제되었지만, Zn-EDTA에 의해서는 억제되지 않았다. PDTC에 의해 Tet-On HeLa 세포내 아연 특이성 신호로서 mag-fura-2의 형광신호가 증가되는 것을 관찰하였다. MT-IIA 발현을 유도하기 위하여 Cadmium과 dexamethasone을 처리하였을 때 16시간째에 농도 의존적으로 MT-IIA transcripts 발현이 증가함을 관찰하였다. 그러나, 이들 약물 자체에 의해서는 NF-kB 활성이 변하지 않았다. Cadmium과 dexamethasone 처리로 MT-IIA 발현을 증가시킨 상태에서는 PDTC에 의한 NF-kB 억제효과가 감소되었다. Doxycycline에 의해 발현이 조절되는 유전자 발현 시스템을 이용하여 MT-IIA를 선택적으로 과발현시켰을 때에도 마찬가지로 PDTC에 의한 NF-kB 억제가 봉쇄되었다. 위의 결과들을 종합하면, MT-IIA의 아연 항상성 조절 기능이 MT-IIA에 의한 NF-kB활성 조절과 연관되어있는 것으로 생각된다.
[영문] Metallothionein (MT), a small protein molecule which can bind or release metal ions,is involved in the regulation of cellular metal homeostasis. Recently, metal ions have beensuggested as important regulators of nuclear factor kappa B 777- rB) activity. In bovinecerebral endothelial cells, zinc has been reported to be a potent negative regulator of NF- rBactivity. Thus, it might be speculated that metal-binding protein, MT, would 7e an importantregulator of NF- rB. In this study, the effect of expression of MT on the inhibitory effEctof zinc on NF- rB activity was investigated. In Tet-On HeLa cells, Zns04 inhibited NF- rBactivity dose-dependently Electrophoretic mobility shift assay (EMSA) revealed that pyrroli-dine dithiocarbamate (PDTC) and pyrithione inhibited NF- rB activity. Cu-EDTA blockedthe effect of PDTC on NF- rB activity but Zn-EDTA did not. PDTC increased thezinc-specific fluorescence signal of intracellular mag-fura-2. Both Cdc12 and dexamethasoneincreased the expression of MT-lIA transcripts in 16 h. After pretreatment of Cdc12 ordexamethasone, PDTC did not efficiently inhibit the NF- rB activity. When Hf-fIA wastransfected in Tet-On HeLa cell using doxycycline-inducible gene expression system,over-expression of MT-lIA by treatment of doxycycline reduced the effect of PDTC on NF-r B activity, which was measured by both EMSA and luciferase assay. These data suggestthat metallothionein can modulate NF- rB activity through regulating the zinc homeostasis.
URI
http://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/126305
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2. 학위논문 > 1. College of Medicine (의과대학) > 박사
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