Epstein-Barr 바이러스 연관 위암에서 Epstein-Barr 바이러스 유전자 발현과 침윤 T 림프구의 clonality

Abstract

[한글]

Epstein-Barr 바이러스(EBV)는 Herpesviridae에 속하는 DNA 바이러스로, Burkitt 림프종, 미분화 비강인후암, 면역저하환자에서 발생하는 림프종 등 림프구 및 상피세포 유래 종양과 연관되어 있다. EBV가 연관된 위암은 전체위암의 6.9-16%이며, 특히 T 림프구의 침윤이 많고 예후가 좋은 lymphoepitheliomalike gastric carcinoma(LELC)는 85%이상에서 EBV와의 연관성이 보고되었다. 이는 림프구가 많이 침윤된 EBV 연관 위암에서 발현되는 EBV의 특정 유전자가 세포형질전환에도 중요하지만, 동시에 항원으로 작용하여 면역반응을 유도한다는 가능성을 시사한다.

본 연구에서는 EBV가 연관된 위암에서 EBV 특이 단백이 종양 특이 항원으로 작용하며, 특정 항원에 반응하는 세포독성 T 림프구(cytotoxic T Iymphocyte: CTL)가 위암조직에 침윤되었을 가능성을 밝히기 위하여, 위암조직에서 발현되는 EBV 유전자 발현과 위암조직에 침윤된 T 림프구의 clonal expansion 여부를 조사하였다. 위암으로 판명되어 위절제수술을 시행하여 얻은 30예의 위암조직을 대상으로 EBV 특이 DNA 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction: PCR)을 시행하였다. 이중 4예의 위암조직에서 EBV가 검출되었으며, EBV 유형은 모두 유형 1이었다. EBV nuclear antigen1(EBNA1)과 BamHI A rightward transcripts(BARTs)를 제외한 EBV 유전자의 발현은 관찰되지 않았다. 이는 본 연구에 사용한 EBV 유전자가 검출된 위암조직의 EBV 감염은 제1형 잠복감염임을 의미한다. EBV가 검출된 위암 조직의 병리소견은 림프구 침윤이 많았으며, 침윤 림프구의 대부분은CD8**+ T 림프구였다. EBV가 검출된 이들 4예의 위암조직에 침윤된 T 림프구의 RNA를 분리하여 T 세포수용체(T cell receptor: TCR) Vβ chain complementary determining region(CDR)3를 증폭할 수 있는 primer를 이용하여 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcriptase-polymerase chain reaction; RT-PCR)을 시행한 결과, 각 예에서 각각 3개, 2개, 4개, 1개의 predominant band를 관찰할 수 있었다. 총 10개의 predominant band의 DNA를 분리하여 TCR Vβchain CDR3의 염기서열 결정하였고, 염기서열에서 추론된 아미노산 서열을 분석한 결과, 위암조직 #967, #974, #1010에서 총 5종류의 T 림프구 클론이 증폭되어 있음을 밝혔다.

이상의 결과는 E8V가 세포형질전환에 중요한 역할을 하지만, EBV 특이유전자의 단백이 동시에 종양제거를 위한 세포면역 반응을 유도하는 항원으로 작용하여 EBV 특이 CD8**+ T 림프구 침윤을 유도하고 증식시키는 데 중요한 역할을 할 수 있다는 가능성을 제시하는 것이다. 본 연구의 결과를 토대로 위암에 발현되는 EBV 유전자중 항원결정기로 작용할 수 있는 유전자의 규명과 EBV 연관 종양의 면역요법을 위한 백신개발과 연관하여 침윤된 CD8**+ T 림프구가 EBV 항원을 인식하여 CTL로 작용할 수 있는가에 대한 계속적인 규명이 필요할 것으로 사료된다.

[영문]

It has been reported that EBV associated gastric carcinomas is signified by the intensive infiltration of Iymphoid cells and expression of EBV latent proteins. Thus, it was assumable that EBV latent proteins which has been speculated to play an important role in the early stage of gastric carcinogenesis, may also be responsible for the recruitment of a certain T cell repertoire to these locale. To examine the above possibility, EBV latent protein expression in gastric carcinoma and usage of T cell receptor among the tumor infiltrating Iymphocytes were analyzed.

By use of the EBV specific DNA PCR, EBV infection in the tissues resected from 30 patients with gastric carcinoma was studied. EBV genome was detected in 4 gastric tumor tissues. Viral gene expression from these 4 EBV-positive gastric carcinoma

tissues was confirmed at the mRNA level. RT-PCR analysis revealed that all of the 4 EBV-positive tumor tissues constitutively expressed EBV nuclear antigen(EBNA) 1 mRNA. However, none of the EBNA2 and LMP-1 mRNA was detected in any of the tumor tissues examined. BARTs were detected in all the samples examined.

CD8**+ T cells were found to be the predominant population among the lymphocytes infiltrated in the EBV-positive gastric carcinoma. In total, 10 predominant bands were detected on TCR Vβ CDR3 specific RT-PCR of RNA from 4 EBV-positive tumor tissues. Sequence analysis of these 10 predominant bands revealed oligoclonal expansion of T cells having 5 specific Vβ chains in 3 EBV-positive tumor tissues.

On the basis of the above findings, it could be suggested that clonally expanded T cells in vivo might be a population of cytotoxic T cells reactive to EBV associated gastric carcinoma. Thus, EBV latent proteins might be a specific antigen of gastric carcinoma cell.