알레르기 환자에서 TLR9 Ligand인 CpG-ODN 자극에 의한 IFN-α 분비와 TLR9 발현

Abstract

[한글]목적 ; 알레르기 환자는 형질세포양 수지상세포의 기능이 떨어지어 Th2 편향된 면역반응이 유도된다는 것을 확인하고자 한다.

대상 ; 연구 동의서를 제출한 19명의 알레르기 성인환자와 17명의 건강한 성인을 대상으로 하였다. 알레르기라 함은 과거력상 기관지 천식 또는 알레르기 비염을 의사에게 진단받고, 5종의 피부시험검사 상에서 한 종류 이상 양성을 보이며, 비강유발검사에서 양성인 환자로 정하였다. 건강한 성인은 이러한 모든 사항에 음성일 때로 하였다.

방법 : 말초혈액단핵세포를 채취하여 Lineage Cocktail (CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56)음성, HLA-DR 양성이면서 CD123양성을 유세포 분석기로 분석하였다. 말초혈액단핵세포에 TLR9 작용제(agonists)인 CpG ODN 2216과 음성 대조를 위해 ODN 2206으로 자극한 후 24시간 상청액을 추출하여 IFN-α를 측정하였다. 또한 real-time RT PCR을 시행하여 TLR9 mRNA 정량분석을 시행하였다.

결과 ; 형질세포양 수지상세포의 분포는 말초혈액단핵세포에서 알레르기 환자는 평균 0.1 ± 0.04% 대조군에서는 평균 0.25 ± 0.23%이었다. TLR9 mRNA 상대적인 양을 나타내는 ΔΔCt는 알레르기 환자에서 1.29 ± 0.41이었고 대조군은 1.25 ± 0.23이었다. TLR9 리간드인 CpG-ODN 2216 자극에 따른 IFN-α의 분비능은 알레르기 환자에서 911 ？ 829 pg/mL 이었고 대조군에서 1,095 ？

[영문]Objectives: The aim of the study was to determine whether the failure of plasmacytoid dendritic cell (pDC) to responds to antigen induces Th2 immune deviation.

Subjects: In this study, 19 allergic subjects and 17 healthy volunteers were subjected to skin and nasal provocation tests. Allergy was defined as reporting ever having had asthma or allergic rhinitis, confirmed by a physician and a positive skin-prick test to mites, cats, dogs or cockroaches, and a positive nasal provocation test using sensitized allergen.

Methods: Peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were collected from subjects and analyzed for the Lineage Cocktail (CD3, CD14, CD16, CD19, CD20, CD56) (-), HLA-DR (+), and CD123 (+) using flow cytometry [fluorescence-activated cell sorting (FACS)]. In addition, we analyzed Toll-like receptor 9 mRNA by reverse-transcriptase polymerase chain reaction. Moreover, the ability of PBMCs to produce IFN-α following stimulation with the TLR9 ligand CpG-ODN 2216 was evaluated in the subjects.

Results: FACS analyses of CD123 (+) revealed a nearly similar distribution for the classical pDC markers in patients (0.1 ± 0.04%) and in controls (0.25 ± 0.23%). The mRNA levels of TLR9 on PBMCs were not different in allergic patients (1.29 ± 0.41) and in controls (1.25 ± 0.23). Similarly, IFN- α production in PBMCs exposed to stimuli of the TLR9 ligand CpG-ODN 2216 was not significantly different between patients (911 ? 829 pg/mL) and controls (1,095 ? 888 pg/mL).

Conclusion: These results suggest that TLR9-dependent immune responses in human pDCs are not associated with allergic status.