한국인에서 분리된 Haemophilus influenzae 균주에 관한 연구

Abstract

[한글]

Haemophilus influenzae는 상기도의 상재균이지만 만성기관지염, 중이염, 결막염, 수막염, 후두개염, 폐렴 혹은 균혈증 등을 초래한다. 이 감염의 빈도는 지역과 인종에 따라 차이가 크다. 즉 세균의 보균자가 많고, 국소방어력과 혈중 항체가 낮은 사람이 많을 때 감염발생이 많다고 알려져 있다. 우리나라에 있어서는 이 감염의 보고가 적은데 이 세균의 배양이 어렵기 때문인지 환자발생이 적기 때문이지 알 수 없다.

이에 이 연구에서는 우리나라 사람의 H. influenzae 보균상태를 조사하고, 환자에서의 분리 상황을 파악하며, 이 세균에 대한 혈청중의 항체의 존재를 확인하고자 하였다. 예비시험으로써 H. influenzae의 분리 및 동정방법에 관해서 검토하였다. 보균상태 조사를 위해서는 1984년 3월부터 1985년 1월까지 호흡기 검체를, 환자에서의 분리상황 파악을 위해서는 1982년 5월부터 1985년 1월까지 호흡기 이외의 검체를 대상으로 하였다.

1. H influenzae의 분리용 배지를 선택하기 위한 예비시험에서 혈액한천보다 Vancomycin, bacitracin clindamycin(VBC)배지에 월등하게 우수하다는 것을 알았다.

2. H. influenzae의 동정시험으로서 X factor disc 법은 41.3%의 위양성율을 나타내었다. 또한 indole 시험법은 tryptophan에서의 4시간 배양이나, tryptone에서의 4시간 배양이나, 또는 MIO 배지에서의 24시간 배양이나 그 결과는 비슷하였다.

Ornithine decardboxylase 시험은 ODC 배지 4시간법이나, MIO 배지 24시간법이나 그 결과는 비슷하였다. Urease 시험은 urea broth 4시간법이 Christensen urea agar 24시간법보다 그 결과가 양호하였다.

3.β-lactamase 생성시험은 chromogenic cephalosporin 법이 가장 신속하고 정확하였다. Disc 법으로 ampicillin에 내성인 균주중 59.2%만이 β-lactamase 양성이었다.

4. H. infulenzae의 호흡기 계통 상재율은 30.6%의 양성율을 보였고, 계절적으로는 5월에 (70.3%0, 연령별로는 2~5세군(57.1%)에서 가장 많이 분리되었다. 분리주 중에는 생물형 VI가 가장 많았고 가장 중요한 serovar b는 4주(2.6%) 뿐이었다.

5. 인두 및 객담을 제외한 전체 임상검체에서 분리된 H. influenzae는 모두 51주 였는데 이 중 43.1%는 1/12~1 세군에서 분리되었다.

이들은 생물형 I와 III이 대부분이었는데, 눈에서는 III형이 더 많았고, 척수액에서느 I형만이 분리되었다. 이중 특히 척수액에서 분리된 4주는 모두 serovar b 이었다. 분리된 균주의 78.4%가 ampicilin에 감수성이었다. 환자의 진단은 39명중 7명이 수막염, 20명은 결막염이었다.

6. 통상방법으로 세균검사 음성인 척수액 67예를 coagglutination 법으로 검사하였으나 H. influenzae serovar v 항원 양성인 것은 없었다.

7. 혈청의 H. influenzae serovar b에 대한 살균력은 1세 미만에서는 6예중 3예에서만 볼 수 있었으나, 1세 이상 혈청에서는 17예중 16예에서 볼 수 있었다. 형광항체는 9세이하에서는 18예중 2예에서만 검출되었으나, 10세 이상에서는 11예중 8예에서 검출되었다.

이상의 성적을 종합하여 볼 때 우리나라에 H. influenzae 수막염 보고가 적은 것은 의료기관의 이용도가 낮거나 검사의 불충분으로 인한 것이기 보다는 그 수막염이 진정으로 드물기 때문에며 그 이유는 더 추구되어야 할 것이지만 serover b의 보균율이 낮은 것도 한가지 요인일 것이라는 결론을 얻었다.

[영문]Heamophilus influenzae, one of normal flora upper respiratory tract, cam cause variuos invasive and noninvasive infections. The incidence of infection is known to be different by level of the antibody of population in an area. In Korea, literatures show a low incidence of this infection. It is not clear whether the low incidence is due to the failure of recognition of the infection because of under utilization of medical facility, incapability of laboratory detection and indiscriminative use of antimicrobial agents before taking specimens or due to true rarity of the infection.

In this study attemps were made to answer the above questions by determining respiratory carrier rate, by isolating the organism from clinical materials and by testing serum bactericidal and fluorescent antibody. As a preliminary study, methods of isolation and biotyping were compared. For carrier study, respiratory specimens obtained from March 1984 to January 1985 were cultured on Vancomycin bacitracin, clindamycin(VBC) agar. To isolate the organism from clinical materials, excluding respiratory specimens, taken from May 1982 to January 1985, and method of staphylococcus streaking on blood agar plate was used. The following results were obtained.

1. From respiratory specimens, the isolation rate was much higher on VBC agar than on blood agar.

2. Hemin requirement test using X factor disc gave 41.3% false positive rate when it was compared to the porphyrin test. Test media recommended for biotyping could be substitued with with conventional Motility idole ornithine decarboxylase medium and Christensen urea agar, provided it was supplemented with IsoVitaleX and Fildes enrichments, and also incubated for 24 hours.

3. For β-lactamase test, the chromogenic cephalosporin method was found to be the simplest and accurate. Among the ampicillin resistant isolates by disk diffusion test, 59.2% were β-lactamase producers.

4. H. influenzae could be isolated from 30.6% of respiratory specimens. The positive rate was high in May (70.3%) and in the age group of 2 to 5 years old (57.1%). The biotype VI isolates were the commonest and only 4 out of 151 isolates were serovar b (2.6%).

5. A total of 51 strains were isolated from various clinical materials, among which 43.1% were isolated from the age group of 1 to 2 months old infant. The most frequent biotypes were I, III and VI. Biotype I was frequently isolated from cerebrospinal fluids while biotype III was from eye discharges. Four out of 6 isolates from cerebrospinal fluid were serovar b.

Among the isolates 78.4% were ampicillin susceptible. Chart was available on 39 patients and it was found that there were 7 meningitis and 20 conjuntivitis patients.

6. All of the 67 cerebrospinal fluid specimens with no bacterial growth by conventional method also gave negative coagglutinaion for H. influenzae serovar b antigen.

7. Sixteen out of 17 serum specimens from >=1 year old showed batericidal activity, while 8 of 11 serum from >= 10 years old showed fluorescent antibody to serovar b.

In view of the studies, it is conclued that the low incidence of H. influensae infection in Korea is not due to the failure of recognition of the infection but is due to true rarity of the infection. The low respiratory carrier rate of serovar b may well be a factor contributing to the rarity of H. influenzae infection in Korea.