전이 전립선암 환자의 말초혈액내 순환상피세포에서 enhancer of zeste homolog 2의 발현 검색

Abstract

[한글]전립선암 환자에서 말초혈액내 순환암세포의 검색은 질병의 진행 및 생존에 의미있는 생체표지자로 연구되어 왔다. 한편 최근에 전사억제자의 일종인 enhancer of zeste homolog 2 (EZH2)가 전이 전립선암에서 과발현되는 것으로 보고된 바 있다. 이에 본 연구에서는 전이 전립선암 환자의 말초혈액내 순환상피세포에서 EZH2 mRNA의 발현을 검색하고, 생체표지자로서의 가능성을 알아보고자 하였다.말초혈액에서 순환상피를 분리하기 위해 Ber-EP4 coated immuno-magnetic beads를, 순환상피세포에서 mRNA를 얻기 위해 oligo dT conjugated immunomagnetic beads를 사용하였다. EZH2 mRNA에 대하여 reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR)을 시행하고, 발현 강도를 측정하였다. EZH2 mRNA의 발현 검색을 위한 본 연구 기법의 민감도 검사를 위해 인간 전립선암 세포주 (PC-3)를 사용하였다. 또한, 정상 대조군, 국소 전립선암 환자군 및 전이 전립선암 환자군에서 각각 10명씩 혈액을 채취하여, 순환상피세포에서 EZH2 mRNA 발현을 조사하였다.전립선암 세포주를 이용한 민감도 검사에서 10개의 종양세포를 검색할 수 있을 정도로 매우 민감한 검사임을 알 수 있었다. 혈액 검체를 이용한 검사에서는 전이 전립선암 환자군에서 EZH2 mRNA의 평균 발현 강도가 정상 대조군 및 국소 전립선암 환자군에서 보다 통계학적으로 높은 것을 알 수 있었다 (p < 0.05, by Mann-Whitney U test).결론적으로 전이 전립선암 환자에서 분리된 순환상피세포에서 EZH2 mRNA의 과발현을 확인할 수 있었다. 따라서 순환상피세포에서의 EZH2 mRNA 발현은 전립선암 환자에서 조기 전이를 예측할 수 있는 유용한 생체표지자가 될 것으로 기대된다. 그러나 말초혈액에서 단핵세포의 오염 없이 순환상피세포를 분리할 수 있는 보다 특이적인 검사법이 필요할 것이다.

[영문]Circulating tumor cells (CTC) have been investigated as a significant marker for clinical progression and survival in men with prostate cancer (PCa). Recently, enhancer of zeste homolog 2 (EZH2), a kind of transcriptional repressor, was reported to be over-expressed in metastatic PCa. In this study, we analyzed EZH2 mRNA of circulating epithelial cells in peripheral blood as a biomarker in patients with metastatic PCa.Ber-EP4-coated immunomagnetic beads were used to harvest CTCs and mRNA was isolated by oligo dT conjugated immunomagnetic beads. The reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) for EZH2 mRNA was performed using EZH2 specific primers and the expression density was measured. The sensitivity of this test for detection of EZH2 mRNA was determined by serial dilutions of human prostate cancer cell line (PC-3). Blood samples were collected from 20 patients with metastatic or localized PCa and 10 healthy volunteers, and EZH2 mRNA expression in CTCs was evaluated.This test was highly sensitive as it could detect 10 tumor cells. EZH2 mRNA expression was obtained from peripheral blood samples of healthy volunteers, patients with localized prostate cancer and metastatic prostate cancer. EZH2 mRNA was strongly expressed in patients with metastatic PCa and the mean value of mRNA image density was significantly higher compared to those of control and localized prostate cancer group (p < 0.05, by Mann-Whitney U test).In conclusion, EZH2 mRNA in circulating tumor cells was over-expressed in patients with metastatic PCa. Thus, it would be a promising marker in detecting early metastasis in PCa. However, more specific technique for detection of circulating tumor cells is needed to avoid mononuclear cell contamination.