구강암종 세포주에서 은행잎 추출물 (EGb 761)의 세포고사 유도

Abstract

[한글]은행잎 추출물중 EGb 761은 구강암종 세포주인 SCC 1483 세포주에서 세포증식 억제와 세포고사를 유도하며 caspase cascade가 관여하는 것으로 알려져 있다. 한편 쥐 대식세포주인 RAW 264.7 세포에 EGb 761의 염증 억제 작용에 mitogen activated protein kinase (MAPK)가 관여한다고 한다. 이에 본 연구의 목적으로 EGb 761에 의한 SCC 1483 세포주의 세포고사가 MAPK 신호전달경로(signal transduction pathway)의 활성화에 의한 것인가를 알고자 하였으며, 활성화된 kinase에 의해 핵내 kinase와 전사인자가 활성화되는지를 보아 어떤 기전으로 세포고사가 일어나는 가를 알고자 하였다.재료 및 방법으로 사람 구강암종 세포주인 SCC 1483 세포주에 EGb 761 250 ㎍/ml을 투여한 후 p-ERK, p-p38, p-JNK 등에 대해 Western blot 분석을 하였다. 또한 활성화되는 MAPK의 억제제를 투여하여 이에 대해 flow cytometry를 시행하였고, kinase-deficient MEK1 mutatant plasmid를 전달감염시킨 후 EGb 761을 투여하여 각 kinase에 대한 Western blot 분석과 flow cytometry를시행하였다.결과로 EGb 761 투여에 의해 ERK MAPK만이 활성화되었으며 ERK 억제제인 PD98059 투여에 의해 세포고사가 유의하게 감소하였다. 또한 MEK1, RSK1, CREB 각각에 대한 dominant negative 연구 상 ERK MAPK/RSK1/CREB의 kinase가 EGb 761 투여에 의해 순차적으로 활성화되었으며 EGb 761에 의해 유도된 세포고사가 각 kinase의 억제로 인해 유의하게 감소하였다.이러한 결과로 사람 구강암종 세포주인 SCC 1483에 EGb 761을 투여 시 세포고사가 유도되며 이 세포고사에 ERK MAPK/RSK1/CREB의 신호전달 경로가 관여함을 알 수 있었다.

[영문]Ginkgo biloba extract (EGb 761) induces inhibition of cell proliferation and apoptosis by the activation of casepase-3 in SCC 1483 oral cavity cancer cells. On the other hand, in lipopolysaccharide-stimulated RAW 264.7 cells, activation of mitogen activated protein kinase (MAPK) is the key event in inhibition of inflammation by EGb 761. Therefore, we have investigated whether MAPK pathway is involved in the apoptotic process by EGb 761 in oral cavity cancer cells.In SCC 1483 oral cavity cancer cells, Western blot analysis, FACS analysis, and transient transfection using MAPK-dominant negative constructs were used.When SCC 1483 oral cavity cancer cells were treated with the concentration of 250 ㎍/ml EGb 761, activation of ERK and apoptosis were noted. This apoptosis was inhibited by the treatment with ERK inhibitor (PD98059). In the transiently transfected cells by MEK1-dominant negative construct, phosphorylations of ERK and RSK1 were inhibited which led to the inhibition of apoptosis by EGb 761. The inhibition of apoptosis was also noted in the transfected cells by RSK1 dominant negative construct and cAMP response element binding protein (CREB)-dominant negative construct.In conclusion, the apoptosis of SCC 1483 oral cavity cancer cells by EGb 761 is linked to the activation of ERK and it can happen via ERK MAPK/RSK1/CREB signal transduction pathway.