배양된 비용상피세포에서 Estracellular signal-regulated kinase를 통한 tumor necrosis factor-alpah에 의한 의한 MUC5AC gene의 발현

Abstract

[한글]

사람의 정상기도에서 점액의 양은 생성과 제거의 균형에 의해 조절되는데 이러한 균형이 무너질 때 점액과분비 등의 임상적인 증상이 일어나게 된다. 만성부비동염에서는 점액분비와 염증성 싸이토카인의 분비가 증가되어 있다. 본 실험의 목적은 첫째, 만성부비동염환자의 비용조직에서 MUC5AC의 발현부위를 확인하고 두번째, 배양된 정상 사람 비용상피세포에서 TNF-a에 의한 MUC5AC 유전자의 발현여부와, 이에 ERK가 작용을 하는지 알아보았다. 마지막으로, 비용조직의 배세포에서 MUC5AC과 활성화된 ERK가 동시에 발현하는지 면역조직화학법으로 확인하여 보았다. 정상 사람 비용상피세포를 게대배양하여, 배양된 Passage-2 비용상피세포에 10 ng/ml 의 TNF-a를 처치하였다. 역전사 중합효소 연쇄반응을 통하여 MUC5AC 유전자의 발현을 알아보았다. Western blotting 으로 ERK 의 관계여부를 알아보았으며, ERK의 특이 억제제인 PD98059를 이용한 inhibitor study를 시행하였다. MUC5AC 항체와 인산화특이ERK 항체를 이용하여 비용조직에서 면역조직화학법을 시행하였다. MUC5AC는 대부분의 사람 비용상피의 배세포에서 발현되었다. 배양된 사람 비용상피세포에서 TNF-a 는 MUC5AC 유전자의 발현을 증가시켰으며, ERK는 TNF-a 의 MUC5AC 유전자 발현에 중요한 역할을 하였다. 면역조직화학법상, 사람 비용조직의 배세포에서 MUC5AC와 ERK가 같이 발현되었다. 배양된 사람 비용상피세포에서 TNF-a로 자극했을 때 ERK의 활성화를 거쳐 MUC5AC 점액의 생성이 증가하는 것으로 생각된다.

[영문]Mucus secretion and inflammatory cytokines are increased in cases of chronic sinusitis with polyp. First, we investigated the localization of MUC5AC protein in human nasal polyps. Second, we examined whether TNF- α induces MUC5AC gene expression and whether ERK plays role in TNF- α -induced MUC5AC gene expression in cultured human nasal polyp epithelial cells. Finally, we investigated whether MUC5AC and activated ERK are co-expressed in goblet cells. Human nasal polyp epithelial cells were isolated and subcultured. Passage-2 polyp epithelial cells were treated with 10 ng/ml TNF- α. ERK involvement was determined by Western blotting and MUC5AC gene expression by RT-PCR. An ERK kinase assay and an inhibitor study using PD98059 were also performed. Immunohistochemical staining using polyclonal MUC5AC antibody and a phospho-specific-ERK antibody was done in nasal polyp. MUC5AC was found to be expressed in the majority of goblet cells in human nasal polyp epithelium. TNF- α induced MUC5AC gene expression, and ERK activation was found to be essential for TNF- α-induced MUC5AC gene expression in cultured human nasal polyp epithelial cells. In addition, both MUC5AC and activated ERK were co-expressed in goblet cells of the human nasal polyp epithelium. TNF-α induces MUC5AC gene expression via ERK in cultured human nasal polyp epithelial cells.