Phenobaibital이 알부민의 빌리루빈 결합능력에 미치는 영향

Abstract

[한글]

신생아 황달은 신생아기에 가장 흔한 질환으로 그 병인과 치료에 대한 연구는 과거 수십년간 발전이 있었으나 핵황달의 위험은 계속되고 있다. 핵황달을 결정하는 가장 큰 인자는 혈청 유리 빌리루빈의 양으로, 이는 알부민의 빌리루빈에 대한 일차결합부의 친화성에 의해 결정된다. 신생아 황달치료에 사용되고 있는 phenobarbital은 간에서 glucuronyl transferase 활성도를 증가시킴으로 빌리루빈의 포합 및 배설을 증가시키고 담즙 흐름을 증가시키는 것으로 알려져 있으나 환자의 혈청을 사용하여 phenobarbital이 알부민의 빌리루빈 결합능력에 미치는 영향을 분석한 연구는 아직까지는 없었다. 따라서 혈액내에서 phenobarbital 혼합전후 알부민의 빌리루빈 결합능력을 산출한 후 강력한 빌리루빈 유리 약물로 알려진 sulfisoxazole을 대조군으로 하여 알부민의 빌리루빈 결합능력을 비교 분석하여 phenobarbital이 알부민의 빌리루빈 결합능력에 어떤 영향을 미치는지 알아보기 위해 본 연구를 시행하였다.

세브란스 병원 신생아실에서 생리적 황달로 진단된 생후 3일부터 6일까지의 건강한 만삭아 9명을 대상으로 혈액을 채취하였다. 혈중 알부민치는 bromcresol green 방법으로 측정하였고, 총빌리루빈 농도와 유리빌리루빈 농도는 peroxidase 효소학적 측정법을 자동화

시킨 UB analyzer UA-1(Kuraray Co. Japan)을 이용하였다. 생체외 실험으로 6명은 동일한 혈청내에서 phenobarbital 투여전후, 3명은 sulflsoxazole 투여전후로 나누어 총빌리루빈 농도와 유리빌리루빈 농도를 측정하였다. 자료 분석은 scatchard plot으로 알부민과 빌리루빈의 결합시 일차결합부에서 이차결합부로의 이행부위, 알부민의 빌리루빈 결합능력 및 친화성을 비교 분석하여 다음과 같은 결과를 얻었다.

알부민과 빌리루빈의 결합시 일차결합부에서 이차결합부로의 이행은 phenobarbital 투여전은 23.2 ± 1.7 mg/dl (빌리루빈-알부민 몰농도비 0.8 ± 0.1), phenobarbital 투여후는 23.3 ± 2.8 mg/dl (빌리루빈-알부민 몰농도비 0.8 ± 0.1)으로 차이가 없었으나, sulfisoxazole의 경우는 투여전이 24.8 ± 0.5 mg/dl (빌리루빈-알부민 몰농도비 0.8 ± 0.1), sulflsoxazole 투여후는 16.1 ± 3.8 mg/dl (빌리루빈-알부민 몰농도비 0.52 ± 0.1)로 의미있는 차이를 보였다 (p<0.001). 알부민의 빌리루빈 결합능력은 phenobarbital 투여전은 28.0 ± 1.5 mg/dl (빌리루빈-알부민 몰농도비 0.9 ± 0.1), phenobarbital 투여후는 28.2 ± 1.8 mg/dl (빌리루빈-알부민 몰농도비 0.9 ± 0.1)로 차이가 없었으나, sulfsoxazole 투여전은 26.6 ± 2.6 mg/dl (빌리루빈-알부민 몰농도비 0.9 ± 0.1), sulfiso

xazole 투여후는 21.8 ± 4.1 mg/dl (빌리루빈-알부민 몰농도비 0.7 ± 0.1)로 의미있는 차이를 보였다(p<0.001). 알부민의 빌리루빈 친화성은 phenobarbital 투여전은 8.1 ± 1.3 × 10**7 L/mol, phenobarbital 투여후는 7.0 ± 1.1 × 10**7 L/mol로 차이가 없었으

나, sulfisoxazole 투여전은 7.4 ± 1.9 × 10**7 L/mol, sulnsoxazole 투여후는 2.6 ± 0.8 × 10**7 L/mol로 의미있는 차이를 보였다(P<0.001).

결론적으로 phenobarbital은 혼합전에 비해 혼합후 알부민의 빌리루빈 결합능력에 큰 영향을 미치지 않았으나, sulfisoxazole은 혼합전에 비해 혼합후 알부민의 빌리루빈 결합능력을 방해하여 낮은 농도의 총 빌리루빈 농도에서도 유리 빌리루빈 농도가 급격하게 증

가하였다. 그러므로 phenobarbital은 알부민의 빌리루빈 결합능력에 영향을 미치지 않지만 sulfisoxazole은 알부민의 빌리루빈 결합능력에 큰 영향을 미치는 것으로 사료된다.

[영문]

Neonatal jaundice is the most common disease in neonates. Rapid developments for treatment of neonatal jaundice have been made in past decades, however the risk of kernicterus is still remained. One of the m77or determining factor for kemicterus is serum level of unbound bilirubin, which is determined by bilirubin binding

capacity and affinity of albumin. Phenobarbital has been used in the treatment of neonatal jaundice, the mechanism of which is to increase the activity of glucuronyl transferase in liver, to increase conjugation and excretion of bilirubin, and to increase bile flow, but the study of effects of phenobarbital on bilirubin binding capacity using human seam were not yet performed. In order to investigate the effects of phenobarbital on bilirubin binding capacity, we measured serum total and unbound bilirubin concentrations, bilirubin binding capacity of albumin before and

after treatment of phenobarbital. Sulfisoxazole, strong bilirubin displaces, was used as the positive control.

Sera were obtained from 9 patients with physiologic jaundice aged between 3 to 6 days after birth. Serum albumin concentrations were measured by bromcresol green method. Total and unbound serum bilirubin concentrations were measured by peroxidase method. Scatchard plots were used to calculate the transitional zone of biliHbin from primary to secondary binding site of albumin, bilirubin binding capacity and affinity. The effects of phenobarbital on biliwbin binding capacity were compared with those of sulfisoxazole and the results were as follows :

Transitional zone for bilirubin in the presence of albumin was not significantly different before and after phenobarbital treatment(23.2 ± 1.7 mg/dl vs 23.3 ± 2.8 mg/dl, bilirubin-albumin molar ratio of 0.8 ± 0.1 vs. 0.8 ± 0.1). However, Transitional zone for bilirubin were significantly lowered after treatment with sulfisoxazo1e than before(16.1 ± 3.8 mg/dl vs. 24.8 ± 0.5 mg/dl, bilirubin-albuminmolar ratio of 0.5 ± 0.1 vs. 0.8 ± 0.1, respectively)(p<0.001).

There was no significant difference of bili겨bin binding capacity(Vme,) and affinity(KD) of albumin before and after treatment with phenobarbital(28.0 ± 1.5 mg/이 vs. 28.2 ± 1.8 mg/dl, 8.1 ± 1.3 × 10**7 L/mol vs. 7.0 ± 1.1 × 10**7 L/mol, respectively) (p<0.001). On the other hand, sulfisoxazole treatment significantly lowered the bilirubin binding capacity and affinity of albumin after treatment sulfisoxazole than before treatment with sulfisoxazole(21.8 ± 4.1 mg/dl vs. 26.6 ±2.6 mg/dl, 2.6 ± 0.8 × 10**7 L/mol vs. 7.4 ± 1.9 × 10**7 L/mol, respectively) (p<0.001) .

In conclusion, phenobarbital had no effects on bilirubin binding capacity of albumin while sulfisoxazole inhibited the bilirubin-albumin binding that resulted in increased unbound bilirubin concentrations even in low total bilirubin concentrations.