이자 효소 분비에 관여하는 세포내 조절 단백에 대한 연구

Abstract

[한글]

본 실험은 Camostat 처치후 비대된 이자의 조직에서 채취한 분산 선포세포를 이용하여 분비자극 물질에 대한 효소 분비반응을 관찰하고, Camostat 또는 분비 자극 물질 처치에 의하여 초래되는 단백 및 인단백 변화를 관찰함으로써 이자 외분비 기능에 영향을 미치는 세포내 신호변환체계와 세포내 조절 단백의 변화를 규명하고자 하였다.

Camostat(200mg/kg)은 4일간 1일 2회 위내 투여하였고, 마지막 투여 12시간뒤 이자를 적출, 검색하여 다음과 같은 결과를 얻었다.

1. 체중 100g당 이자 무게는 대조군에 비해 camostat 처치군에서 126%로 증가하였으나, 단위 단백당 amylase 활성은 현저히 감소하여 camostat 처치군에서는 대조군의 41%에 불과하였다.

2. 분리된 선포세포의 amylase 기초유리는 대조군과 camsotat 처치군간에 차이가 없었으나, CCK-8 또는 carbachol 자극시 최대 amylase 유리율은 대조군에 비하여 camostat 처치군에서 각각 65%, 46%로 감소하였다. Secretin 자극시 amylase 유리율은 camostat 처치

의 영향을 받지 않았다.

3. Camostat 처치군에서 24-28kD, pl 4.5-8.5 단백의 양이 대조군에 비해 증가되었으며, 25kD, pl 5.0 단백의 인산화 중가가 관찰되었다.

4. CCK-8 또는 secretin 자극시 34kD, pl 4.7 단백의 인산화가 증가되었고, 이는 대조군 및 camostat 처치군 모두에서 관찰되었다.

5. 선포세포내 tyrosine 인산화 단백은 camostat 처치군에서 전반적으로 증가되었다. CCK-810-10 M 투여시 대조군에서는 tyrosine 인산화가 중가되었으나, camostat 처치군에서는 오히려 감소되었다. Secretin 자극은 tyrosine 인산화에 뚜렷한 영향을 미치지 않았다. 이상의 결과로 보아 CCK-8 또는 secretin은 이자 선포세포내 34kD, pl 4.7 단백의 인산화를 특이하게 증가시키므로 이 단백의 인산화 과정에는 phospholipase C 및 adenylate cyclase가 모두 관여할 것으로 생각된다. 또한 camostat를 장기간 투여하였을 때, tyrosine 인산화가 증가하는데, 이는 CCK 수용체를 매개하는 자극 분비과정에 serine/throsine protein kinase 뿐만 아니라 protein tyrosine kinase/phosphatase의 기능적 연관도 시사한다.

[영문]

Secretagogue-induced changes of intracellular proteins were evaluated in dispersed pancreatic acini. The rats were treated with camostat(FOY-305, 200 mg/kg body wt., P.0.) for 4 days and dispersed pancreatic acini were prepared at 12 hours after the last treatment. To observe the profile of intracellular phosphoproteins, acini were incubated in a buffer containing 32P, and the 32P-labeled Phosphoprotein profiles were analyzed by two-dimensional gel electrophoresis. The effects of secretagogues on the exocrine function of dispersed acini were estimated by measuring amylase relase. Following results were obtained.

1. After camostat treatment, pancreatic weight per 100g body weight increased to 126% relative to the control group, while amylase activity per milligram protein decreased to 41% of control group. The amylase release from dispersed pancreatic

acini was increased by secretagogues dose-dependently.

2. The maximum release of amylase from camostat-treated acini stimulated by CCK-8 or carbachol decreased markedly(65% and 46%, of control, respectively), while the amylase release by secretin was similar to the control.

3. The group of intracellular proteins(24kD, pI 4.5∼ 8.5) was increased in quantity by camostat.

4. CCK-8 or secretin increased phosphorylation of a Protein(34kD, pI 4.7) in both camostat-treatedand control groups.

5. CCK-8 increased tyrosine phosphorylation in the acini of control rats.

However, in camostat-treated rats, the basal level of tyrosine phosphorylation was increased which was rather decrersed by CCK-8. Secretin did not change the level of tyrosine phosphorylation in acini.

These results indicate that both phospholipase C and adenylate cyclase induce phosphorylation of an intracellular acinar protein (34kD, pI 4.7) and camostat treatment increases the basal level of tyrosine phosphorylation in acinar cells, and this suggests that not only serine/threonine protein kinase but also protein

tyrosine kinase/phosphatase are involved in the process of stimulation-secretion coupling via CCK receptors.