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Floating법으로 배양한 사람 비점막 상피세포의 분화

Other Titles
 Differentiation of cultured human nasal epithelial cells by floating method 
Authors
 이명호 
Issue Date
1995
Description
의학과/박사
Abstract
[한글]

상피세포의 정확한 기능과 역할에 관한 연구를 위해 호흡상피의 배양이 다양하게 시도되어 왔으나, 대부분의 배양모델에서 섬모상피세포의 분화가 관찰되지 않았으며 일부 배양된 상피세포에서도 섬모는 2∼3일 밖에는 유지되지 못하고 편평상피 모양의 세포로 변하는, 즉 분화가 이루어지지 않는 문제점이 있었다. 그 후 세포부유(suspension)배양법과 air-interface법을 이용하여 분화를 유도하는 시도가 되어 왔지만 분비상피세포가 관찰되지 않는 등의 문제점이 있었다. 따라서 연구자는 보다 생체와 가깝게 분화를 유도할 수 있는 배양체계를 개발하기 위해, floating법을 이용하여 섬모상피세포와 분비상피세포의 분화를 동시에 유도할 수 있는 in vitro 배양법을 개발함으로써 섬모상피세포의 병태생리학적 연구에 기초적인 모델을 만들고자 하였다. 연구재료는 사람의 하비갑개 점막과 비용(nasal Polyp)을 이용하였으며 배양액은 cholera toxin, retinoic acid, 10% NU serum 및 항생제가 함유된 Dulbecco's modified Eagle medium 과 Ham's nutrient F 12, 1:1 혼합용액을 사용하였다. 콜라젠 젤위에 배양되어 합류를 이룬 세포들이 상피세포임을 확인하기 위하여 항 keratin 면역형광 염색과 투과전자현미경으로 관찰하였다. 세포들이 합류를 이룬 후에 floating 시켜 분화를 유도하였다. 연구결과 배양된 상피세포들이 in vivo와 유사하게 섬모상피세포와 분비상피세포로 분화된 것을 관착할 수 있었고, 그 수의 정량계측에서도 in vivo와 유사하였다. 따라서 floating이 사람 비점막 상피세포의 분화를 유도하는 좋은 방법으로 생각된다. 또한 이 배양법은 세포의 증식과 분화과정이 따로 일어나기 때문에 각각에 대한 연구를 동시에 할 수 있고 또한 섬모발생 및 운동에 대한 연구에도 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 생각된다.



[영문]

Various in vitro culture systems have been used to study the functional Properties of respiratory epithelium and to unravel the Pathogenesis of its dysfunction. However, these culture systems have some problems which dissociated epithelial cells cultured on plastic or collagen become extremely squamous and lose their cilia. Others have shown that reciliation takes place after suspension, or using air interface, even after total deciliation of monolayer cultured cells. We applied the floating method to human nasal epithelium. Dissociated human nasal

epithelial cells from nasal polyp or inferior turbinate were cultured in Ham's nutrient Fl2-DMEM 1:1mixed solution supplemented with 10% NU serum, choleratoxin, retinoic acid and antibiotics. In monolayer cultures, the epithelial cells grew to

confluency on collagen gels and became squamous with decilliation within 7 days.

After floating the collagen gel, differentiation of epithelial cells was noted.

Seven days after floating, some cells were ciliated and some cells with secretory granules were observed. Fourteen days after floating, nearly all cells were ciliated and a few cells with microvilli were observed. Our results show that the differentiated human nasal epithelial cells similar to in vivo epithelium can be induced by floating culture method. And therefore, this culture system will provide an appropriate model to study the functions of human nasal epithelium in vitro.
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https://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/118052
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