사람 유두종바이러스 16형이 존재하는 세포주에서 antisense RNA에 의한 성장억제

Abstract

[한글]

사람 유두종바이러스는 자궁경부암의 발생과 밀접한 연관이 있으며, 특히 사람 유두종바이러스의 E6 및 E7 단백질이 암 발생에 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. 이들 단백질의 표현을 선택적으로 억제하기 위하여 E6, E7 및 E6E7에 대한 antisense RNA를 만들

수 있는 재조합 DNA를 제조하고 각각을 pMnASE6, pMnASE7 및 pMnASE6E7이라 명명하였으며, 이들을 사람 자궁경부암 세포주들에 transfection 하여 그 효과를 관찰하였다. 사람 유두종바이러스 16형이 존재한다고 알려져 있는 CaSki 세포에 pMnASE6, pMnASE7 및 pMnASE6E7을 transfection 시킨 모든 경우에서 세포의 성장과 DNA 합성이 감소하였으나, 사람 유두종바이러스가 존재하지 않는다고 알려져 있는 C-33A 세포에서는 이러한 효과를 관찰할 수 없었다. CaSki 세포에서의 antisense RNA에 의한 성장 억제 효과는 혈청의 농도를 증가시킬수록 더 컸다. 암의 전이에 중요한 역할을 하는 collagenase의 활성도에 antisense RNA가 미치는 영향을 알아보기 위해 zymography를 시행한 결과 자궁경부암 세포주들에서 정상 자궁결부 상피세포보다 현저히 증가된 72 kDa collagenase 활성도를 관찰할 수 있었으나 antisense RNA에 의한 효과는 없었다. Western blot 분석과 세포 면역화학 염색을 이용하여 E6에 의해 분해가 촉진되는 p53의 단백질 표현을 관찰한 결과 pMnASE6와 pMnASE6E7를 CaSki cell에 transfection 시킨 경우에 p53 표현이 증가되었다. 이상의 결과를 미루어 E6 및 E7이 사람 유두종바이러스가 존재하는 자궁경부암 세포주의 성장에 중요한 역할을 하고, 이들의 표현억제가 성장 지연을 초래하며, antisense E6 및 E6E7의 경우 증가된 p53이 성장억제에 중요한 역할을 하는 것으로 사료된다.

[영문]

Human Papillomavirus (HPV) type 16 and 18 contribute to the development of cervical cancers. In terms of the malignant progression induced by HPVs, the mechanisms appear to be related with the activities of the two viral oncoproteins, E6 and E7. Although how they work in ontogenesis is not clearly understood at the molecular level, it has been reported that E6 and E7 can bind to known tumor suppressor proteins, p53 and Rb, respectively, and that the E6 and E6-associated protein (E6-AP) complex can induce the ubiquitin-mediated degradation of p53. To

investigate the effect of antisense RNA of HPV type 16 (HPV-16) on the growth of cervical cancer cell and the expression of P53, plasmids capable of expressing antisense RNA to E6, E7 or both were constructed and transfected into human cervical carcinoma cell lines, CaSki or C-33A. Cell growth and DNA synthesis were

reduced when any of antisense RNA to E6, E7 or both was expressed in CaSki containing HPV-l6 DNA, but there was no significant change in C-33A which does not contain any type of HPV. These growth inhibitory effects of antisense RNAs in CaSki were potentiated by increasing the serum concentration. Zymographic analysis revealed that there was no effect of antisense RNA on 72 kDa and 92 kDa collagenase activities, although the activities of 72 kDa collagenase of cervical cancer cell lines were increased compared to that of normal cervical keratinocyte. The p53 expression was increased in Western blot analysis and immunocytochemical staining when antisense RNA of E6 or E6E7 was expressed in CaSki. These results suggest that E6 and E7 are related to cell proliferation of HPV infected cancer cell line, and that p53 may play an important role on the growth inhibition induced by antisense RNA of E6 or E6E7.