흑질의 퇴행성 변화를 유발시킨 백서에서 동종 태자 중뇌세포 이식에 관한 연구

Abstract

[한글]

본 실험은 6-hydroxydopamine을 이용하여 백서의 파킨슨씨병 모형을 만든 후 동종 태자중뇌 조직을 0.6% glucose-saline용액과 Kawamoto 및 Barrett의 냉장 보존액에 각각 섭씨 4도에서 냉장 보존하면서 시기별로 파킨슨씨병 모형에 이식하고 그 결과를 관찰하였다.

이식전 trypan blue를 이용한 세포 생존율(cell viability)과 이식 전후의 apomorphine을 이용한 행동반응검사를 실시하여 이식의 효과를 확인하였고 이식 8주 후 tyrosine hydroxy-lase에 대한 항체를 이용하여 면역조직화학적 염색을 시행하여 이식된 조직의 생존 유

무를 관찰하였다. 본 실험을 통하여 저자는 이식 공여 조직의 냉장 보존 처리를 통한 조직의 장기간 보존가능성을 연구하고자 하였고 다음과 같은 결과를 얻었다.

1. 6-hydroxydopamine을 백서 질에 주사하였을 때 apomorphine 행동 반응 검사상 회전 운동이 백서 파킨슨씨병 모형의 범주에 속한 경우가 백서 68마리 중 29마리로 약 42%의 성공율을 보였다.

2. 동종 태자 중뇌 조직을 0.6% glucose-saline 용액하에서 분리 적출 후 즉시 이식을 시행할 경우의 평균 세포 생존율이 80.3 ± 7.0%였다. 0.6% glcose-saline 용액하에 섭씨 4도에서 냉장 보존한 경우 보존 1일째에 평균 세포 생존율이 66.0 ± 4.0%, 보존 3일째

에 평균 세포 생존율이 14.0±4.1% 였다. Kawamoto 및 Barrett의 냉장 보존액에 보존시 보존 1일째에 평균 세포 생존율은 75.0 ± 6.0%, 보존 3일째에 평균 세포 생존율이 51.3 ± 4.7%, 보존 5일째에 평균세포 생존율이 20.0 ± 9.0% 였고 두 보존용액간의 통계적으

로 유의한 생존율의 차이를 발견할 수 있었다(p <0.05).

3. Apomorphine 행동 반응 검사상 이식 공여 조직을 적출 즉시 이식한 경우 평균 55%의 회전 운동의 감소를 보였다. 0.6% glucose-saline 용액을 이용 냉장 보존을 시행한 경우 보존1일째에 평균 35%의 감소를 보였다. Kawamoto 및 Barrett의 냉장 보존액의 경우 보

존 1일째 평균 41%, 보존 3일째의 경우 평균 31%의 감소를 보였고 역시 두 보존용액간에 통계적으로 유의한 회전운동의 차이를 발견할 수 있었다(p<0.05).

4. 태자 중뇌 조직 추출 즉시 이식을 한 경우, 0.6 % glucose-saline용액의 경우 보존 1일째,Kawamoto 및 Barrett의 냉장 보존액의 경우 보존 1일째, 보존 3일째에서 모두 이식 8주 후시행한 tyrosine hydroxylase 면역조직화학적 염색 소견상 tyrosine hydroxylase의 항체에 양성인 세포를 관잔 할 수 있었다.

5. 냉장보존 후 이식을 한 경우 0.6% glucose-saline용액의 경우 보존 3일째, Kawamoto및 Barrets의 냉장 보존액의 경우 보존 5일째에서 이식 8주후 tyrosine hydroxylase 면역조직화학적 염색 검사상 tyrosine hydroxylase의 항체에 양성 반응을 보이는 세포를 관찰할 수 있었다.

위의 결과를 통하여 백서 동종 태자 중뇌 조직의 이식전 냉장 보존 처리의 효과를 확인하였고 향후 인간에게 이용할 수 있는 효과적인 냉장 보존액의 개발이 필요할 것으로 사료된다.

Fetal mesencephalic transplantation in rat parkinsonian

model with 6-hrdroxydopamine

Jong Hyun Choi

Department of Medical Science The Graduate School, Yonsei University

(Directed by Professor Sang Sup Chung)

Storage of fetal neural tissue before transplantation into the host brain has

been regarded as an important variable for improving techniques of transplantation.

The optimal time for storage of fetal neural tissue should be within several hours

of acquisition. We studied the possibility of storage of fetal donor tissue at 4℃

in a preservation solution described by Kawamoto and Barrett(1986) and 0.6%

glucose-saline solution. After storage of fetal donor tissue at 4℃, the viable

cells were counted using trypan blue stain and cell viability was calculated. Then

it was transplanted into the caudate of rat parkinsonian model which was made with

6-hydroxy-dopa-mine. All rats after transplantation were behaviorally tested with

apomorphine and were sacrificed for histological analysis at 8 weeks after

transplantation. In rats which were transplanted with the cells stored for 1 day at

4℃ in the 0.6% glucose-saline solution, tyrosine hydroxylase immunoreactive

neurons in the right striatum could be found. In rats which were transplanted with

the cells stored for 1 day or 3 days at 4℃ in the preservation solution (Kawamoto

and Barrett, 1986), tyrosine hydroxylase immunoreactive neurons in the right

striatum could be found. In rats which were transplanted with the cells stored at

4℃ for 3 days or 5 days in the 0.6% glucose-saline solution and for 5 days in the

preservation solution (Kawamoto and Barrets, 1986),tyrosine hydroxylase

immunoreactive neurons in the right striatum couldn't be found. In this study, we

conclude that storage of fetal donor tissue at 4℃ makes it possible to Prolong the

time interval between the dissection of the fetal donor and transplantation in the

host.

[영문]

Storage of fetal neural tissue before transplantation into the host brain has been regarded as an important variable for improving techniques of transplantation.

The optimal time for storage of fetal neural tissue should be within several hours of acquisition. We studied the possibility of storage of fetal donor tissue at 4℃ in a preservation solution described by Kawamoto and Barrett(1986) and 0.6%

glucose-saline solution. After storage of fetal donor tissue at 4℃, the viable cells were counted using trypan blue stain and cell viability was calculated. Then it was transplanted into the caudate of rat parkinsonian model which was made with 6-hydroxy-dopa-mine. All rats after transplantation were behaviorally tested with apomorphine and were sacrificed for histological analysis at 8 weeks after transplantation. In rats which were transplanted with the cells stored for 1 day at 4℃ in the 0.6% glucose-saline solution, tyrosine hydroxylase immunoreactive

neurons in the right striatum could be found. In rats which were transplanted with the cells stored for 1 day or 3 days at 4℃ in the preservation solution (Kawamoto and Barrett, 1986), tyrosine hydroxylase immunoreactive neurons in the right striatum could be found. In rats which were transplanted with the cells stored at

4℃ for 3 days or 5 days in the 0.6% glucose-saline solution and for 5 days in the preservation solution (Kawamoto and Barrets, 1986),tyrosine hydroxylase immunoreactive neurons in the right striatum couldn't be found. In this study, we conclude that storage of fetal donor tissue at 4℃ makes it possible to Prolong the time interval between the dissection of the fetal donor and transplantation in the host.