임상검체에서 분리된 Methicillin 내성 Staphylococcus aureus의 성상

Abstract

[한글]

Staphylococcus aureus는 임상 검체에서 가장 흔히 분리되는 그람양성 구균이다. Penic illinase에 안정한 Penicillin 제제에 대해서도 내성인 S.aureus(methicillin-resistant S. aureus, MRSA)의 분리 빈도가 점차 놓아지고 있는데, 이들은 대부분의 항포도상구균 항균제에 대해서도 내성이므로 그 정확한 감별이 대단히 중요하다.

MRSA중 heterogeneous형 세균은 정확한 검출이 어려운데 우리나라에서 분리되는 MRSA는 대부분이 homogeneous형으로 추측되고 있다. 우리나라에서 분리되는 MRSA에 대한 methicillin의 MIC도 연구자에 따라서 다르며, oxacillin 내성균주 중 sulbactam에 의해 ampicillin에 감수성을 보이게 되는 균주의 본질도 아직 확실치 않다.

이에 본 연구에서는 임상검체에서 분리된 S.aureus를 대상으로 시험된 통상적인 oxacillin디스크 확산법의 정확성과, 배양 조건의 영향을 검토하며, MRSA에 대한 methicillin의 MIC를 밝히고, definite형 억제대를 보인 균주가 진정한 homogeneous인지를 증명하며, 우리나라에서 분리되는 대부분의 MRSA가 definite 형 억제대를 보이는 이유가 항균제에 노출되었기 때문인지를 시험하여 다음과 같은 결과를 얻었다.

1. 임상검체에서 분리된 S. aureus 138주를 통상의 oxacillin 디스크법으로 시험한 바 45주 (33.6%)가 내성을 보였으며, intermediate의 결과를 보인 균주는 없었다. 334주를 대상으로 한 시험에서 그 억제대는 균주에 따라서 6mm 또는 15mm 이상이었고 intermediate의 범위에 속하는 것은 없었다.

2. 0xacillin 디스크법으로 감수성을 보인 85주와 definite형 내성을 보인 39주는 한천 선별법으로는 일치된 성적을보였으나 occult형 내성 균주2주중 1주는 한천선별법으로는 감수성을 보였다. 이 두균주에 대한 methicillin의 MIC는 각각8과 16 ㎍/ml이었다.

3. Oxacillin 디스크법으로 definite형 내성을 보인 균주에 대한 methicillin의 MIC는 >64 ㎍/ml이었다. Occult형 내성을 보인 두 균주에 대한 methicillindml MIC는 각 접종균 수가 10% CFU일때 8 ㎍/ml 과 16㎍/m1. 10 6 CFU 일 때 16㎍/m1과 1024㎍/ml이었다.

4. 디스크 확산법으로 30℃ 나 37℃에서 definite 형성을 보인 균주를42℃에서 시험한 바, 27주중 19주는 7->20mm의 억제대를 형성하였고, occult형 내성 균주는 >18mm의 억제대를 형성하였다.

5. Sulbactam의 억제대 크기에 대한 영향 비교에서 definite형 균주는 sulbactam 병합 디스크법에서 억제대가 크게 형성되었으나, occult형 1균주에 있어서는 그 차이가 더 컸다. Occult 형 내성인 두 균주에 대한 methicillin의 MIC는 각각 87㎍/ml 과 16㎍/ml이었다.

6. EOP시험에서definite형 MRSA 1주는 homogeneous형 증식 양상을 보였으며, occult형 MRSA 1 주는 그 정도가 심하지는 않았으나 heterogeneous형 증식 양상을 보였다.

7. Definite형 MRSA를35℃에서 10대 계대 배양 후에는 2주가, 30대 후에는 1주가, 40대 후에는 1주가 occult 형 억재대를 보였다.

이 연구에서 oxacillin 디스크 확산법으로 35℃에서 시험하면 대부분의 MRSA 균주가 definite 형 억제대를보이므로 상당히 정확한 MRSA의 검출이 가능하지만 42℃에서는 부정확한 성적을 보이며, 대부분의 균주에 대한 methicillin 의 MIC 치는 높으나, 그 성적은 접

종량에 따라서 크게 달라지므로 ampicillin/sulbaotam 디스크에 감수성을 보이는 oxacillin 내성 균주가 MRSA 인지 MSSA 인지는 MIC 시험으로도 판단이 불확실하고, definite 형 내성주는 EOP시험 성적으로 볼 때도 homogeneous형임이 확실하며. 분리주의 대부분이 definite형 억제대를 보이는 원인중의 일부는 시험 균주가 분리되기 전에 항균제에 노출되었기 때문이라는 결론을 얻었다.

[영문]

Staphylococcus aureus is the most frequently isolated pathogen among the gram-positive cocci. As the S aureus strains resistant to penicillinase-resistant penicillins(methicillin-resistant S. aureus, MRSA) became more frequently isolated, their accurate differentiation became very important because they are frequently

resistant to many antistaphylococcal antimicrobial agents.

Accurate differentiation of heteroresistant MRSA by disk diffusion tests is known to be difficult. The accuracy of the speculation that the MRSAs isolated in Korea are of the definitive resistance type is not known. MICs of methicillin against the MRSA isolated in Korea differ significantly depending on the investigators. The nature of oxacillin resistant S. aureus , which is also resistant to ampicillin but susceptible to ampicillin plus sulbactam, is not known.

The purpose of the study was to evaluate the accuracy of oxacillin disk diffusion test by the methicillin-salt screening test, to test the MIC of methicillin against MRSA, to disclose the nature of ampicillin-resistant hut ampicillin plus sulbactam

susceptible isolates, to determine the possibility that the definitive type isolates are indeed homogeneous type, and. finally, to reveal the reason for the predominance of definitive type isolates. The following result were obtained.

1. Among the 138 clinical isolates ofS. aureus which were tested by the routine disk diffusion test 45(33.6%)were oxacillin resistant, and none showed intermediate results. In another series of tests with 334 isolates, the zone diameters were either 6 mm (none) or over 14 mm: therefore, none fell in the intermediate category.

2. All of the S. aureus isolates. 85 oxacillin-susceptible and 39 definitive-type resistant showed the same results as in the agar screening method. However, one of the two occult resistant isolates was susceptible by the screening method. MIC of methicillin against these two isolates were 8 μg/ml and 16 μg/ml, respectively.

3. MIC of methicillin against isolates with definite-type oxacillin resistance were ≥64μ/ml. MIC of methicllin against two isolates with occult type resistance were 8μg/ml and 16 μg/ml when the inoculum was 10⁴CFU,and 16μg/ml, and 1024 μg/ml when the inoculum was 10⁴CFU. respectively,

4. Among the 27 isolates with definitive-type oxacillin resistance at the incubation temperature of 30℃ and 37℃, 19 showed zone diameters of 7∼>20mm when the test was performed al 42℃. The isolates wish occult-type resistance showed zone diameters>18mm.

5, Most of the definitive isolates showed a larger inhibition zone to the ampicillin plus sulbactam disk than to the ampicillin disk The difference in zone size was greater in the two occult-resistant isolates.

6. The isolate with definitive-type resistance showed the EOP pattern of homogeneous type MRSA. while the isolate with occult-type resistance showed the pattern of heterogeneous MRSA.

7. Serial subculture of 29 definitve-type MRSA at 35℃ resulted in four occult-type isolates: after ten transfers two isolates, after 30 transfers one and after 40 transfers another one.

It was concluded that the oxacillin dick diffusion test at 35℃ correctly differentiates most MRSAs because most of them are of the definitive type; however, an occasional occult-type MRSA may be mistaken for MSSA. At 42℃ the disk diffusion test is inaccurate. MIC of methicillin against MRSA are very high, and as it changes depending on the inoculum, MIC testing can not reveal the nature of oxacillin resistant and ampicllin plus sulbactam susceptible isolate. Definitive-type MRSA is indeed homogeneous type. The reason That most of MRSA isolated in Korea are of the definitive type is probably due to the exposure of the strains to an antimicrobial agent prior their isolation.