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Taxol의 방사면역측정을 위한 표지화합물 합성

Other Titles
 Preparation of 125I-labelled taxol for radioimmunoassay 
Authors
 금준섭 
Issue Date
1996
Description
임상병리학과/석사
Abstract
[한글] 본 연구에서는 항암제 taxol의 혈중약물농도를 측정하기 위해 개발된 기존의 (3)**H 을 사용한 방사면역측정법보다 계측이 편리하고 반감기가 상대적으로 짧아 폐기가 용이한 (125)**I 를 사용하여 새로운 방사면역측정방법을 개발하기 위한 기초 연구로서, taxol에 대한 특이 항체를 생산하고 (125)**I 를 표지시킨 항원을 합성하고자 하였다. 표지항원으로 사용할 2'-[(125)**I ] iodotyraminehemisuccinyltaxol의 합성은 먼저 taxol의 C-2'부분에 위치한 hydroxyl기를 succinic anhydride와 반응시켜 2'-hemisuccinyltaxol을 합성하고, 이 합성물을 mixed anhydride 방법을 사용하여 (125)**I 를 표지시킨 tyramine의 amine기와 peptide synthesis를 통해 결합시켰다. Iodo-bead 방법과 chloramine-T 방법으 로 tyramine에 (125)**I 를 표지시키고 gel chromatography를 실시하여 (125)**I -labelled tyramine을 얻었다. 각 합성물의 반응정도는 thin-layer chromatography를 통해 확인하였고, U.V. 흡광도의 변화로 재확인하였다. 2'-hemisuccinyltaxol 합성실험에서의 반응수율은 80%를 나타내었고, 2'-[(125)**I] iodotyraminehemisuccinyltaxol의 합성 시에는 96%의 반응수율을 나타내었다. 토끼에서 taxo1에 대한 면역혈청을 얻기 위해서 carrier protein으로 bovine serum albumin(BSA)을 사용하였으며 taxol과 BSA간의 결합은 2'-tyraminehemisuccinyltaxol 접합체의 합성반응에서와 동일한 과정을 거치고 단지 tyramine대신 BSA를 넣어 BSA의 amine기와 2'-hemisuccinyltaxol을 반응시킴으로서 2'-hemisuccinyltaxol-BSA 접합체를 얻었다. 반응물을 증류수에서 투석하여 2'-hemisuccinyltaxol-BSA 접합체를 분리정제한 후 동결건조하였다. 반응 합성물의 U.V. 흡광도를 통해 BSA 한 분자당 7 .5분자의 2'-hemisuccinyltaxol이 결합하고 있음을 확인하였다. Anti-taxol 혈청의 역가를 검정하기 위해 실시한 2'-[(125)**I] iodotyraminehemisuccinyltaxol과 토끼 면역혈청과의 역가 검정실험에서는 1:20 의 역가에서 B/T(%)가 약 40%를 보였다. 이와 같은 결과는 방사면역측정용으로 사용하기에는 너무 낮아 역가가 높은 항체를 얻기 위한 실험이 계속되어야 할 것으로 토의하였다.
[영문] In this study, in order to develope a radioimmunoassay system using I-125 for measuring taxol levels in serum, which is more convenient for detection as well as waste disposal, we synthesized 2'-[(125)**I] iodotyraminehemisuccinyltaxol as aradioactively antigen and produced anti-taxol specific antibody via immunization. 2'-[(125)**I] Iodotyraminehemisuccinyltaxol was prepared from 2'-hemisuccinyltaxol using a mixed anhydride method. 2'-hemisuccinyltaxol was synthesized by esterification of taxol at C-2' with succinic anhydride. For iodination of tyramine, we adopted iodo-bead and chloramine-T method, and obtained (125)**I -labelled tyramine by gel-chromatography. Purity of the product was determined by thin-layer chromatography. Finally, we were able to obtain 2'-hemisuccinyltaxol in 80% yield and 2'-[(l25)**I] iodotyraminehemisuccinyltaxol in 96% yield. Anti-taxol serum was produced from the rabbit immunized with 2'- hemisuccinyltaxol-BSA conjugate synthesized from 2'-hemisuccinyltaxol via a mixed anhydride method, as mentioned 2'-[(125)**I] iodotyraminehemisuccinyltaxol synthesis. The reaction mixture was dialysed against water and then freeze dried. According to the calculation U.V. spectra of the product, the molar ratio of BSA to 2'-hemisuccinyltaxol was 1:7.5. In the reaction between 2'-[(125)**I] iodotyraminehemisuccinyltaxol and anti-taxol seam for determining antiserum titer, about forty percent of B/T(%) ratio were obtained in titer 1:20. However, since this anti-taxol serum titer was relatively low, a direct application of the antiserum for RIA system is improper. Further boosting processes to obtain higher antiserum titer will be necessary.
URI
https://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/138141
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2. Thesis / Dissertation (학위논문) > 5. Others (기타) > Others (기타)
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