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P388 murine leukemia cell에 대한 여러 항암제의 효과

Other Titles
 Effect of different anticancer agents on P388 murine leukemia cells 
Authors
 양세환 
Issue Date
1995
Description
임상병리학과/석사
Abstract
[한글] 본 연구는 현재까지 제시된 여러가지 apoptosis를 유발하는 물질과 혹은 apoptosis가 일어나는 세포, 그리고 관련 기전 등을 비교 평가하자는 목적아래 여러가지 항암제를 P388 murine leukemia 세포에 처리해서 그것들이 나타내는 세포 독성능과 apoptosis, 그리고 apoptosis가 일어날 때 관련될 수 있는 신호 전달계 효소등의 조사와 마지막으로 apoptosis와 세포주기와의 관련성을 밝히고자 하였다. SK 302-B, Adriamycin, etoposide, Mitomycin-C를 항암제로 이용해서 cytotoxicity를 조사한 결과, 세포의 성장을 억제시키는데 있어서 SK 302-B가 가장 능력이 컸고 그 다음으로는 Adriamycin, Mitomycin-C, etoposide의 순으로 나왔다. 그리고 apoptosis의 주요 지표인 DNA 분절 현상을 살펴본 결과 세포 5x 10**5 개당 SK 302-B와 Adriamycin은 1㎍처리시에 가장 분절 현상이 현저했고, etoposide는 40㎍, Mitomycin-C는 50-200㎍까지 대체로 높은 농도로 처리되었을때 분절이 나타났다. 시간상으로도 차이가 있어서 SK 302-B와 Adriamycin은 처음에는 똑같이 3시간경 부터 DNA 분절이 보이다가 SK 302-B의 경우에는 6시간이 지나면서 점차 사라지고, Adriamycin은 24시간까지 지속됨을 보였다. etoposide와 Mitomycin-C 경우에는 각각 24시간, 48시간대에 가장 현저히 보임을 알 수 있었다. apoptosis시에 관여할 수 있는 신호 전달계 효소들중 protein kinase C(PKC)와 MAP kinase를 살펴보고자 했는데, 우선 PKC의 관련성을 알아보고자 PKC의 activator인 PMA와 inhibitor인 H-7을 처리해서 DNA 분절변화를 살펴본 결과 Mitomycin-C, SK 302-B와 함께 PMA를 처리시에 DNA분절이 억제되고, H-7처리시에는 DNA 분절이 항암제만을 처리한 것보다 더욱 잘 나타나는 것으로서 PKC가 apoptosis를 억제하는 역할을 함을 확인할 수 있었다. 한편, apoptosis시에 MAP kinase의 활성의 조사는 western blotting을 통해 살펴보았는데 SK 302-B 처리시에 1분, 5분때에 약간의 gel shifting을 보이고 apoptosis가 일어나는 4시간대에는 다시 band가 원래 자리로 오면서 오히려 활성을 잃어버리는 것으로 보인다. 항암제 처리후 나타날 수 있는 세포주기상의 변화를 알아보고자 SK 302-B를 apoptosis를 일으킬 수 있는 농도로 처리한 것과 PKC의 관련성을 확인 하고자 PMA도 같이 처리것을 함께 살펴본 결과 대조군에 비해 SK302-B 처리 24시간대에는 약간의 G1 arrest가 유발되고, 48시간대에는 G2 arrest가 크게 유발됨을 알 수 있었다. 함께 처리한 PMA의 효과는 그다지 크게 나타나지는 않았지만 유발된 G1 arrest와 G2 arrest을 조금 완화시키는 면이 있음이 나타났다. 이상의 결과들로서 세포 독성능이 다른 각 항암제들은 저마다 다른 apoptosis의 유발시기와 적정 농도를 지니고 있고, 이러한 apoptosis의 유발시에 PKC의 활성화는 apoptosis를 억제하는 것이 보였고 이는 PKC가 apoptosis 조절 기전에서 중요한 역할을 수행함을 확인 할 수 있는 좋은 근거가 된다고 생각된다. 또 MAP kinase 의 경우에는 항암제 처리 직후 활성화되고, apoptosis가 한창 일어날 때는 활성이 없는 것으로 보인다. 또한 세포 주기 분석 결과, 항암제 SK 302-B 처리후 시간에 따라 G1 arrest와 G2 arrest가 유발되는 것을 확인 할 수 있었다.
[영문] After P388 cells were treated with 4 anticancer agents, SK 302-B, Adriamycin, Mitomycin-C, and etoposide, fellowing experiments were performed: cytotoxicity measurement by MTT assay, DNA fragmentation analysis by agarose gel electrophoresis, PKC association by using PMA, H-7,MAP kinase association by western blotting, and cell cycle analysis by flow cytometry. As a result of cytotoxicity measurements, SK 302-B has the highest cytotoxic ability among 4 anticancer agents when was anaylsed with Ic^^50 values. All anticancer agents induced DNA fragmentation, but SK 302-B and Adriamycin which had higher cytotoxic effect had induced DNA fragmentation in early time and with low dose. In order to clarify PKC association with apoptosis, PMA, PKC activator, was used. In this experiment PMA inhibited DNA fragmentation induced by Mitomycin-C, but didn't prevent DNA fragmentation induced by etoposide. These results implicate that PKC probably act on apoptosis mechanism but not in absolutely. It was thought that MAP kinase, a major signal transduction regulator, was activated in 5 min after SK 302-B treatment by finding gel shifting and doing anti-phosphoserine, anti-phosphothreonine immunoblotting. But, it was unknown whether MAP kinase was associated with apoptosis mechanism, or not. Cell cycle analysis resulted in G1 arrest in 24 hours and G2 arrest in 48 hours after SK 302-B treatment. These a11 results emphasize that apoptosis and cell cycle arrest induced by anticancer agents are related with signal transduction sad cell cycle regulator, and cancer therapy using anticancer agents will be advanced if deeply studied in this area.
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https://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/138128
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