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Listeria monocytogenes와 salmonella spp.에 대한 특이 단세포군 항체 분비 세포주의 제조

Other Titles
 Production of monoclonal antibodies that react with listeria monocytogenes 4b and pathogenic salmonella spp 
Authors
 김소영 
Issue Date
1997
Description
임상병리학과/석사
Abstract
[한글] 본 연구는 최근 냉장 식품에서 주목되고 있는 대표적 병원성균인 Listeria monocytogenes와 과거부터 발병률이 가장 높은 식중독 원인균으로 알려져있는 병원성 Salmonella 균종의 신속 검출용 kit 제품의 국내개발을 위한 단세포군 항체 분비세포 제조에 관한 내용이다. L. monocytogenes와 병원성 Salmonella 균종의 열 추출물을 항원으로 사용하여 BALB/c mouse에 면역시킨 후 항체 생성능을 계속 검사하여 mouse 혈청내 항체가의 증가를 확인한 다음, mouse로부터 얻은 비장세포를 항체생성능을 가진 B림프구 공여자로 사용하여 SP2/ 0-Agl4 myeloma cell과 세포융합시켰다. HAT(Hypoxathine Aminopterin Thymidine)와 3% agarose가 포함된 배지를 이용하여 많은 non-fusion cell 중에서 monoclonal hybridoma를 선별함으로써 단세포군 세포주를 얻기 위하여 제한 희석(limit dilution)을 하는 기존의 과정을 생략할 수 있었다. 이러한 방법을 이용하여 L. monocytogenes에 대해서 104개 집락주를, 병원성 Salmonella 균종에 대해서는 144개 집락주를 얻어 이를 96-well tissue culture plate에 옮긴 후, 각 단세포군 항체 분비세포주의 특이 항원(L. monocytogenes와 병원성 Salmonella 균종) 에 대한 반응성을 알아보기 위하여 ELISA(Enzyme-linked Immunosorbent Assay)법을 수행한 다음 항체를 생성하는 양성 세포군만을 선택, 증폭시켰다. 이에 L. monocytogenes에 대해서는 2개의 clone을, 병원성 Salmonella 균종에 대해서는 5개의 clone을 얻어 다른 미생물과의 교차반응 검사를 실시한 결과, L. monocytogenes에 대해 특이 단세포군 항체를 분비하는 2종류의 세포주와 병원성 Salmonella 균종에 대해 특이 단세포군 항체를 분비하는 3종류의 세포주를 얻었다. 식품 매개성 질병의 원인체로 널리 알려진 L. monocytogenes나 병원성 Salmonella 균종을 검출하기 위해 배양을 통해 확인동정을 하는 기존의 방법들의 가장 큰 단점을 면역화학적 원리에 기초를 둔 항원 특이성 단세포군 항체를 사용함으로써 신속하고 정확한 검출 이 가능할 것으로 판단된다.
[영문] Listeria monocytogenes can grow over a wide range of temperature(3-45℃), which makes it potentially hazardous, especially for refrigerated products. Because most refrigerated foods have relative short shelves lives, a rapid, accurate, easy-te-use method for detecting L. monocytogenes in food is needed. The most common method to detect L. monocytogenes in food is a cultural procedure which depends on selective media to enrich for this organism and biochemical reactions to identify it in 7 to 21 days. Salmonella is the etiologic agents of food-borne salmonellosis and also the agents that cause typhoid and paratyphoid fever. Traditional methods for the isolation of Salmonella spp. involve the use of enrichment and selective media to allow the detection of small numbers of sometimes stressed bacteria in 4 to 5 days. As the need for a rapid, organism specific test for L. monocytogenes and pathogenic Salmonella spp. is clearly needed, research was conducted to produce hybridoma cell line providing monoclonal antibodies which specifically react with L. monocytogenes and pathogenic Salmonella spp. Mouse monoclonal antibodies which specifically recognize the pathogen L. monocytogenes and Salmonella spp, were produced by fusion of spleen cells from animal immunized with L. monocytogenes and Salmonella spp. to an SP2/0-Agl4 myeloma partner.
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URI
https://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/137452
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