간흡충감염 진단을 위한 ELISA법의 효용성에 관한 연구

Abstract

[영문]

[한글]

간흡충 감염을 진단하는데 있어서 일부 임상가나 연구자들이 흔히 피내반응검사를 하여

왔으나 그 특이성이나 감수성이 양호하지 못하며 Im(1974)에 의해 간흡충 성충 항원을

이용한 간접형광항체법이 소개되기도 하였으나 항원의 조제, 특이성 및 감수성에 있어 문

제점이 적지 않다.

본 연구는 효소표지항체(enzyme-labelled antibody)에 의한 항원-항체-효소표지항체의

복합반응을 이용하여 효소의 기질용액의 색상변화를 광량계의 흡수량으로 표기하는 enzym

e-linked immunosorbent assay(ELISA)를 실시하여 항원 및 시험혈청의 적정 희석정도를

측정하고 간흡충 감염과 타질환에서의 결과를 비교하여 간흡충 감염의 진단을 위한 임상

및 역학적 조사에 이용될 수 있는지를 검토하였다.

ELISA법은 polystyrene microplate를 이용하여 시행하였으며, 항원을 microplate에 부

착시키고 시험혈청을 반응시킨 다음 peroxidase conjugated IgG(Cappel Lab., U.S.A.)를

반응시키고 기질용액으로 ortho-phenylenediamine(OPD) 용액을 넣어 색상의 강도를 ELISA

광량계(Dynatech Co., Swiss)를 이용하여 파장 492nm에서 흡수광량을 측정하였다. 이때

conjugate의 적정희석 배율은 1:5,000이었으며, 간흡충 수용성항원은 1:3,000, 그리고 시

험혈청은 1:500으로 희석하여 시행하였다.

간흡충 감염환자 84명, 비감염 건강인 24명, 이질아메바증 20명 및 톡소플라스마증 11

명의 ELISA치를 비교한 바 간흡충 감염환자에서 1.222±0.358로 다른 세균보다 유의하게

높았다(p<0.05).

대변검사에서 충란검사 음성이고 피내반응검사 역시 음성인 24명의 ELISA치는 0.527±0

.160으로, 충란음성이고 피내반응검사양성(15명)의 0.785±0.146과 유의한 차이가 없었으

나 충란양성이고 피내반응검사 양성(25명)인 경우는 ELISA치가 1.102±0.256으로 상기 두

군보다 유의하게 높았다(p<0.05).

간흡충 감염환자에 있어 대변 1g내 충란수(EPG)를 1,000미만, 10,000미만 그리고 10,00

0이상으로 구별하였을 때 충란수의 증가에 따라 ELISA치가 높아지는 경향을 보였으나 유

의한 차이는 관찰되지 않았고(p>0.05), EPG에 따른 혈청내 면역글로브린 G(IgG)치의 변동

역시 관찰되지 않았다(p>0.05). 정맥혈내 호산구의 백분율이 21%이상인 경우 ELISA치는

그 이하보다 높았으나(p<0.05), 호산구 백분율의 변동에 따른 IgGcl의 차이는 없었다(p>0

.05). 호산구 백분율이 21% 이상인 경우 EPG는 그 이하에 비해 유의하게 높았다(p>0.05).

그러나 성별, 나이에 따른 ELISA치의 차이나 IgGcl의 차이는 인정되지 않았다(p>0.05).

이상의 결과로 보아 ELISA법은 간흡충 감염을 진단하는데 있어 epg, 성별, 나이, 혈청

내 IgG치의 변동에 영향을 받지 않으며 그 결과에 있어 비감염 건강인 또는 타 기생충성

질환과 확실히 구별됨으로써 특이성은 물론 감수성 및 재현성이 매우 높아 임상적 진단은

물론 역학적 조사 연구에도 이용될 수 있을 것으로 생각된다.

Study of Enzyme-linked Immunosorbent Assay(ELISA) method in Serodiagnosis of

Clonorchis sinensis Infection

Joong-Keun Lee

Department of Medical Science The Graduate School, Yonsei University

(Directed by Professor Chin-Thack Soh, M.D. and Professor Keun-Tae Lee, M.D.)

A number of techniques were deviced for immunological diagnosis of Clonochis

sinensis infection. Although the intradermal skin test has been the most applicable

method for the epidemiological study on diagnosis of clonorchiasis in Korea, low

specificity and sensitivity have been also recognized(Walton and Chyu, 1956).

In the present study the enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) was tested in

the diagnosis of Clonorchis sinensis infection using whole worm extracted

antigen(2.87 mg/ml of protein) and peroxidase conjugated anti-IgG, and

ortho-phenylenediamine as a substrate by micro-method according to techniques of

Voller et al.(1979) with minor modifications.

Sera tested were seperated from 84 clonorchiasis, 20 amoebiasis, 11 toxoplasmosis

and 24 parasitefree cases. The intradermal skin test, aggs per gram of feces(EPG),

peripheral blood eosinophilic leucocyte count and serum immunoglobulin G levels

were also checked.

In the preliminary study optimal conjutgate dilution, antigen and serum dilution

were 1/5,000, 1/3,000 and 1/500 respectively.

The ELISA values in clonorchiasis, parasite-free, amoebiasis and toxoplasmosis

were 1.2220±0.358, 0.525±0.160, 0.820±0.421 and 0.531±0.249 respectively, and

that in clonorchiasis was significantly higher than those of other groups(p<0.05)

With the sera from 24 of parasite egg-negatives in stool and skin test negatives,

15 of egg-negatives and skin test positives, and 25 of both tests positives, the

ELISA was done and each values were stastically compared by group. The ELISA values

of both tests positives were significantly higher than those of other two

groups(p<0.05), than showed more sensitive than the skin test.

There was no correlation among the ELISA values by the grade of egg deposition in

stool(p<0.05) and serum IgG levels(p<0.05), sexes(p<0.05) and ages(p<0.05) in

clonorchiasis.

In clonorchiasis, the ELISA value in the cases of more than 21% of peripheral

eosinophilic leucocyte was higher than that of below 10%(p<0.05), but no

correlation was found between percentages of peripheral eosinophilic leucocyte and

serum IgG levels.

The egg deposition in stool among the cases of more than 21% of peripheral

eosinophilic leucocyte was significantly higher than those of lee than 21%(p<0.05).

In conclusion, the present study suggests that the ELISA technique can be applied

to diagnose the Clonorchis sinensis infection as applicable and reproducible method

in comparison with the conventional methosds, specially in application for

sero-epidemiological study.