실험적 Naegleria 감염에 있어 세포매개성 면역에 관한 연구

Abstract

[영문]

[한글]

병원성이 강한 Naegleria fowleri ITMAP 359, 병원성이 약한 Naegzeria jadini 0400,

비병원성인 Naegleria gruberi EGB를 마우스에 감염시켰을 때 세포매개성 면역반응의 차

이를 관찰하고 이들 아메바를 감염시킨후 경과된 감염시간에 따른 세포매개성 면역반응과

혈청내 항체가의 변동을 관찰하였다.

15gm내외의 ICR마우스를 secobarbital로 복강내로 주사하여 마취시킨후, CGVS배지를 사

용, 무균적으로 계대배양한 각 아메바의 영양형을 5㎕에 lOx10**4 개가 함유되도록하여

마우스 오른쪽 비강에 떨어뜨려 감염시켰다.

감염시킨후 1 4, 7, 17, 14일에 각각 지연형과민반응과 [(3)**H]-thymidine을 이용한

마우스 비장세포의 아세포화(芽細胞化)를 관찰하였다. 사용된 Naegleria lysates의 제조

는, 배양된 각 아메바 영양형을 초음파분쇄기로 파괴시킨후 20,000 g로 원심침전하여 상

층액을 사용하였다. 아세포화 정도를 관찰하기 위하여 mitogen으로 concanavalin A (con.

A)와 lipopolysaccharide (LPS)를 사용하였다. 감염기간별 혈청내 항체가의 측정은 Voll

er등(1976)의 효소표식면역검사법(ELISA)을 시행하였다.

1) N. fowleri를 감염시킨 마우스의 사망율은 75.7%, N. jadini를 감염시킨 실험군에서

는 6.2%,N. gruberi감염에 의한 마우스의 사망은 관찰되지 않았다.

2) 지연형과민반응은 N.fowleri감염시는 감염초부터 대조군에 비해 반응이 증가하였고

7일후에는 감소하였다. N jadini감염시에도 감염후 1일째부터 증가하였으며 감염기간이

지나갈수록 점차 감소하였다. 또한N. gruberi의 감염시 대조군과 비교할 때 통계학적 유

의성은 없었다.

3) T임파구 아세포화 정도는 N. fowleri감염시 감염 10일후 증가하였으나 대조군에 비

해 차이가 없었다. N. jadini에 감염된 경우는 대조군과 차이가 없음을 알 수 있었고, N.

gruberi감염시에는 감염후 감소하는 경향이 있었다. B임파구 아세포화 정도는 N.fowleri

감염군, N.jadini감염군 및 N.gruberi감영군에서 대조군과 차이가 없음을 알 수 있었다.

4) N.fowleri에 감염된 마우스의 혈청내 항체가는 감염 7일후부터 증가하였고, N,jadin

i감염시에는 14일후 증가하였으며, N.gruberi에 감염된 마우스에서의 항체가는 대조군과

차이가 없었다.

이상의 성적을 종합하면 병원성이 강한 N.fowleri,병원성이 약한 N.jadini 및 병원성이

없는 N.gruberi에 각각 감염된 마우스에서 세포매개성 면역반응과 혈청내 항체가에 있어

차이가 있음을 알수 있었다.

Study on the Cell-Mediated Immunity in Experimental Naegleria spp. Infections

Soon-Gone Lee

Department of Medicine Science The Graduate School, Yonsei University

(Directed by Prof, Kyung-Il Im, M.D.)

Observations were made regarding differences in cell-mediated responses in mice

infected with strongly pathogenic Naegleria fowleri ITMAP 359, weakly pathogenic

Naegleria jadini 0400 and non-pathogenic Naegleria gruberi EGB respectively

variations in the cell-mediated responses and changes in the antibody titer level

according to the duration after infection were also noted infecting these three

species of the amoebae.

Infections were done by dropping 5㎕ saline suspension containing 10×10**4

trophozoites cultured axenically in the CGVS medium into the right nasal cavity of

ICR mice aging around 6-7 weeks, under the anesthesia by intraperitoneal injection

of secobarbital.

Following infection, delayed type hypersensitivity (DTH) responses in the footpad

and blastogenic responses of the mouse spleen cells using ((3)**H)-thymidine were

observed on day 1, 4, 7, 10 and 14 after infection. In the preparation of the

amoeba lysates, each of the cultured trophozoites were destroyed with an

ultrasonicator, and centrifugated at 20,700g. The supernatants, amoeba lysates were

used as mitogen and antigen for ELISA. Concanavalin A (con. A) and

lipopolysaccharide (LPS) were used as mitogens in the blastogenic response. ELISA

for the measurements of the serum antibody titer were conducted by Voller et al.

(1776) method.

1) The mice infected with N. fowleri showed the mortality rate of 75.7% and 6.2%

for the N. jadini infected group, while no dead mouse was observed for N. gruberi

infections.

2) In regard to DTH responses in the N. fowleri infected mice, the level

increased in comparison with the control group but declined after 7 days. An

increase was also noted for the N. jadini group after 1 day, but gradual decreases

could be observed through the infection period. In addition, no difference could be

noted between the N. gruberi infected and control groups.

3) Concerning the blastogenic responses of splenocytes, it increased after 10 day

in the experimental group of N. fowleri, infection, but the differences were not

statistically significant compared with the control group. It was evident that N.

jadini group was not different from the control group either, and while there was a

tendency of the decrease in N. gruberi infected group.

It was also found that the N. fowleri, N. jadini and N. gruberi infected groups

had no differences with the control group regarding the blastogenic responses of

splenorytes by LPS.

4) The serum antibody titer of the N. fowleri and N. jading infected mice

increased day 7 and 14 after infection respectively, while the N. gruberi infected

mice showed no increase.

In the summary of the results, it was observed that there were differences in the

cell-mediated immunity responses and the antibody titer of serum in the mice

infected with strongly pathogenic N. fowleri, weakly pathogenic N. jadini and

non-pathogenic N. gruberi respectively.