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Decorin과 shHSP27을 발현하는 아데노바이러스의 항 종양 효과

Other Titles
 Anti-tumor effect of adenovirus expressing shHSP27 and decorin 
Authors
 김지나 
Issue Date
2013
Description
의과학과/석사
Abstract
환자의 체내에서 유전자 변이로 형성된 암 세포가 조직을 이루어 원발성암 조직을 형성하고 원발성암 조직의 세포가 혈관을 통해 다른 조직으로 이동하여 전이암을 형성할 경우 환자의 예후는 아주 나빠지게 된다. 암세포에서 decorin의 발현을 유도하고 HSP27의 발현을 억제한다면 암의 전이를 억제하고 더불어 성장을 저해하는 효과를 유도할 수 있는지 검증하기 위하여 암세포에 decorin과 shHSP27을 전달하고자 decorin과 shHSP27을 발현하는 아데노바이러스를 제작하였다. 먼저 복제불능 아데노바이러스에 상동 재조합을 통하여 E1부분에 decorin단백질을 E3부분에 human HSP27의 발현을 낮추어 주는 shHSP27을 삽입하여 실험을 진행하였다. decorin은 small leucine-rich proteoglycan으로 알려져 있고 이 또한 종양의 혈관형성을 억제한다는 보고가 있다. Decorin은 처음에 악성종양의 성장을 도울것이라고 생각되어졌지만 그 후에 EGFR을 포함한 여러가지 receptor tyrosine kinase들과 다른 ErbB family member의 발현억제를 유도한다는 것이 밝혀졌다. 다른 연구에서는 β-catenin의 역할을 막아 세포의 성장을 막거나 VEGF-A의 분비를 막아 암세포 주변으로 혈관이 형성되는 것을 막아줄 수 있다는 보고가 되어있다. HSP27은 여러 암세포에서 암세포의 성장, 전이 등을 돕는다고 알려져 있다. 이는 항 세포고사 단백질의 유도로 이루어 지며 이러한 HSP27의 발현을 저해할 경우 암세포의 성장 억제 및 전이 억제의 효과를 얻을 수 있다는 것이 밝혀져 있다. 이전의 연구내용을 바탕으로 두 유전자를 동시에 발현하게 하여 암세포에서 항 종양 및 전이 효과를 얻고자 본 연구를 진행하였고 그 결과는 다음과 같다. Decorin과 shHSP27을 발현하는 복제불능 아데노바이러스를 감염시킨 암세포에서 Real-time PCR을 시행한 결과 대조군 바이러스를 감염시킨 암세포에 비해 TGF-β family의 mRNA level이 감소하였으며 이와 마찬가지로 단백질 발현양도 감소하는 것을 관찰할 수 있었다. 이는 decorin과 shHSP27모두에서 유도가 되지만 HSP27의 발현을 저해할 경우 더 많은 효과를 얻을 수 있으며 decorin, shHSP27 모두를 발현하는 암세포에서도 이와 비슷한 수준으로 감소하고 있는 것을 알 수 있다. 이 두 유전자에 의해 항 종양 효과를 나타내는 단백질의 발현 혹은 활성 상태를 살펴본 결과 pSTAT3, p-p65, p-Lyn의 활성과 β-catenin의 발현양이 감소하고 전이를 유도하는 물질인 N-cadherin의 발현양이 감소하는 것을 확인하였다. 실제로 이러한 변화가 암세포의 성질에 영향을 미치는지 알아보기 위하여 다음 실험을 진행하였다. Migration assay를 시행한 결과 decorin혹은 shHSP27을 각각 발현시켰을 때 보다 두 유전자를 동시에 발현시켰을 때 가장 이동능력이 저해되는 것을 알 수 있었다. 다음으로 decorin과 shHSP27을 암세포 내에서 발현시킬 경우 invasion assay 에서 암세포의 침윤 능력이 감소하는 것을 확인하였다. 더불어decorin, shHSP27을 각각 혹은 모두 발현시켜 얻은 배지를 처리했을 때 대조군 바이러스를 감염시켜 얻은 배지를 처리한 HUVEC세포 보다 혈관생성이 억제되는 것을 확인하였다. 이를 통해 두 유전자로 인한 항 종양 및 전이 관련 단백질의 변화로 인해 실제 암세포에서 세포의 이동 및 전이가 저해되는 결과를 얻었고 clonogenic assay를 통해 dl324-DCN-shHSP27 바이러스를 감염시킨 암세포의 군락형성능력이 현저히 감소하는 것을 확인하고 proliferation assay를 통해 세포의 성장이 억제되는 것을 확인하였다. 위의 결과들을 통해decorin의 발현유도 및 HSP27발현의 억제는 암세포에서 성장억제의 효과를 가져올 수 있을 뿐만 아니라 암세포의 이동능력과 전이를 막아줄 수 있을 것으로 생각된다.
URI
https://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/134597
Appears in Collections:
2. Thesis / Dissertation (학위논문) > 1. College of Medicine (의과대학) > Master's Degree (석사)
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