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백서 간장세포 내에서 ATP-citrate lyase 생합성 조절에 관한 연구
DC Field | Value | Language |
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dc.contributor.author | 이윤수 | - |
dc.date.accessioned | 2015-11-22T07:16:27Z | - |
dc.date.available | 2015-11-22T07:16:27Z | - |
dc.date.issued | 1989 | - |
dc.identifier.uri | https://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/127491 | - |
dc.description | 의학과/박사 | - |
dc.description.abstract | [한글] 본 연구는 백서 간장 세포질에서 de novo 지방산 합성에 필요한 acetyl CoA를 공급하는 ATP-citrate lyase (ACL)가 insulin에 의해 어떻게 조절되는지 그 기전을 밝히기 위하여 백서간장세포로부터 이 효소를 분리 정제하고, 이에 대한 항혈청을 얻었다. 백서 간장세포로부터 ACL을 polyethylene glycol 및 ammonium sulfate로 추출하고 DEAE-Sephacel ion exchange chromatography 및 Sephacryl S-300 gel filtration chromatography를 시행하여 순수분리 하였으며, SDS-PAGE를 시행한 결과 분자량 110,000, 60,000 및 50,000에 해당하는 단백질대가 나타났으며, 이중 110,000에 해당하는 단백질대를 electroelution하여 분자량 110,000의 순수한 단백질을 얻었다. 백서 간장 100g으로부터 총 35mg의 효소를 분리하였으며 specific activity는 7.71 units/mg이었다. 분자량 110,000, 60,000 및 50,000의 단백질이 섞여있는 효소용액과 electroelution하여 얻은 분자량 100,000의 순수한 단백질로 제조한 항혈청을 사용하여 immunodiffusion과 immunostaining한 결과 분자량 60,000과 50,000의 단백질은 이 효소 분리 과정에서 분자량 110,000의 단백질이 가수분해되어 형성되었음을 확인하였다. 백서를 3일간 굶긴 다음 대조군은 설탕 용액을 체중 kg당 3g 경구 투여하고 실험군은설탕용액을 체중 kg당 3g 경구 투여한 후 즉시 insulin (체중 100g 당 1.5units)을 복강내로 주사하고 3시간 후에 간장으로부터 총 RNA를 분리하고 각군의 총 RNA 일정량을 nitrocellulose membrane에 slot boot한 후 Lee등(1989)이 분리한 ACL에 대한 cDNA (3.Okb)가 삽입된 clone (pGACL25-1)으로부터 CDNA를 분리하여 이 cDNA를 probe로 사용하여 hybridization과 autoradiography를 시행한 결과 insulin 처리군에서 ACL mRNA함량이 대조군에서 보다 약 5배 증가하였다. 이상과 같은 결과로 미루어 insulin이 백서 간장세포에서 ACL 활성 및 합성 증가를 조절하는 기전의 하나는 세포질 내 이 효소를 합성하는 mRNA의 함량이 증가되기 때문인 것으로 사료된다. [영문] This experiment was designed to illustrate the mechanism that insulin increases the biosynthesis of ATP-citrate lyase (ACL) in the rat liver. ACL from rat livers was purified to near homogeneity. The total 35 mg of purified enzyme was obtained from 100g of rat livers, and the specific activity was 7.71 units/mg protein. The molecular weight of the enzyme was estimated to be 110, 60, and 50kDa by SDS-PAGE. One hundred and ten kDa band was electroeluted and anti-ACL antibodies were prepared using this purified enzyme. By immunostaining methods, 60kDa and 50kDa proteins were identified as the hydrolytic products of 110kDa ACL protein. Using the purified antibody against ACL, cDNA for ACL was cloned, and ACL mRNA content in the cytosol of rat livers of insulin-treated group, after 3 hours of intraperitoneal insulin treatment, was measured by hybridization analysis using ACL cDNA as a probe. The content of mRNA encoding ACL in the cytosol increased 5 folds in the insulin-treated group compared to the control group. It is concluded that the increase in the activity and biosynthesis of ACL in the cytosel of the rat liver by insulin is due to the increased amount of mRNA encoding ACL in the cytosol. | - |
dc.description.statementOfResponsibility | restriction | - |
dc.publisher | 연세대학교 대학원 | - |
dc.rights | CC BY-NC-ND 2.0 KR | - |
dc.rights.uri | https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.0/kr/ | - |
dc.title | 백서 간장세포 내에서 ATP-citrate lyase 생합성 조절에 관한 연구 | - |
dc.title.alternative | Regulation of ATP-citrate lyase biosynthesis by insulin in the rat liver. | - |
dc.type | Thesis | - |
dc.identifier.url | https://ymlib.yonsei.ac.kr/catalog/search/book-detail/?cid=CAT000000045509 | - |
dc.contributor.alternativeName | Lee, Youn Soo | - |
dc.type.local | Dissertation | - |
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