T 세포 백혈병 세포주에서 T 세포 수용체 β쇄 CDR3 유전자 염기서열의 규명

Abstract

[한글]

급성 T 세포 백혈병 환자에서 클론성 T종양 세포를 검출하고 악성T 세포 클론에 대한 CDR3 특이 oligonucleotide를 합성하여 환자의 minimal residual leuckemic disease(MRD)를 검색하는 방법은 다른 방법에 비해 민감도가 높으며 CDR3 특이 probe은 개개인의 환자에 특이한 클론성 T 세포를 검출할 수 있다.

본 연구에서는 T 세포 백혈병 세포주인 Jurkat 세포주에서 degenerate primer인 Vβ universal primer를 사용하여 클론성 TCR β쇄 cDNA를 증폭하고 PCR 산물을 유전자 클로닝하여 염기서열을 규명하였다. 그 결과 RT-PCR시 나타나는 약 300 bp fragment가 PCR β쇄 증폭 산물이라는 것을 밝혔으며 Jurkat 세포주의 COR3 부위를 포함한 부분적인 염기서열 및 아미노산 서열을 밝혔다.T 세포 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia: ALL) 세포에서 TCR은 약 40% 정도 표현되는 것으로 알려져 있으나 mRNA 표현이 어느 정도

인지는 알려져 있지 않다. 그러므로 T 세포 ALL 환자중 몇 %에서 TCR β쇄 클론 특이 probe을 사용하여 MRD를 검출할 수 있을지는 현재까지 알 수 없다. 그러나 TCR을 표현하는 40%이상의 환자에서는 TCR β쇄의 RT-PCR 시행 후 클론 특이 probe을 사용하면 MRD를 효과적으로 검출할 수 있으리라 추정되며 이는 다수의 임상 환자를 대상으로 확인해 보아야 할 것으로 생각된다.

[영문]

In order to develop a method for the detection of minimal residual leukemic disease(MRD) in T cell acute lymphocytic leukemia(T cell ALL), T cell leukemia cell line was used to detect clonal TCR β chain mRNA and to synthesize CDR3 specific

oligonucleotide probe. For the Jurkat cell line clonal TCR β chain cDNA was amplified by using RT-PCR with oligonucleotide primer, Vβ universal primer. As the result of RT-PCR an approximate 300 bp fragment of the TCR chain was obtained, and

the partial identification of the TCR β chain gene and the amino acid sequence of the fragment were done by gene cloning and sequencing. The gene sequence of TCR β obtained was identified as Vβ8-Jβl.2-Cβ2. Diversity gene segment could not be found. Within the β chain, the CDR3 region was identified as 12 amino

acids(SFSTCSANYGYT).

It is known that TCR is expressed about 40% of the all T cell ALL. However it is not known what percentage of the TCR β chain mRNA expression translates into the actual TCR molecule. It is not certain how many patients with MRD can be detected by this method used in this study, but this technique might be useful to detect MRD in at least 40% of the patients of the T-cell ALL.