진핵세포에서 혈액 응고인자 VIII의 발현 유도

Abstract

[한글]

지금까지 혈우병 A의 치료는 사람 혈장에서 분리한 혈액 응고인자 Vlll(FVlll) 단백질

제제의 정맥주사에 의존하고 있으나 이러한 방법은 바이러스 감염등 위험성을 내포하고

있으며 건강한 혈액의 공급도 제한되어 있다. 따라서 본 연구에서는 재조합 FVlll 단백질

을 진핵세포에서 효과적으로 발현시킬 목적으로 CMV 바이러스 promoter와 mouse metallot

hionein I(MT-I) promoter를 삽입한 진핵세포 발현 vector에 B-domain을 제거한 FVlll(FV

lll-B)cDNA를 삽입하여 FVlll-B 단백질을 발현할 수 있는 pCMVVlll-B와 pMTVlll-B vector

를 제조하고 이를 Chinese hamster ovary(CHO) 세포에 전입시켜 FVlll-B 단백질의 합성과

분비를 유도하여 다음과 같은 결과를 얻었다. pCMVVlll-B 또는 pMTVlll-B를 전입시킨 CH

O 세포에서 FVlll-B cDNA로부터 전사된 mRNA를 역전사 중합효소 연쇄반응을 실시하여 확

인하였으며 Northern blot hybridization을 실시하였을 경우 발현 vector를 전입하고 72

시간 동안 배양한 후 pCMVVlll-B를 전입시킨 CHO 세포나 pMTVlll-B를 전입시킨 CHO 세포

에서 FVlll-B mRNA가 모두 감지되었으나 G4l8을 처리하여 계대배양한 세포에서는 FVlll-B

mRNA가 감지되지 않았다. FVlll-B 발현 vector를 전입시키고 72시간 배양한 후 CHO 세포

배양액에 나타난 FVlll-B 단백질을 ELISA방법으로 측정한 결과 pCMVVlll-B 전입군에서는

7.0, 49.6, 58.3 mEqU/ml의 FVlll이 검출되었고 pMTVlll-B 전입군에서는 9.9, 16.0, 44.

3 mEqU/ml의 FVlll이 감지되었다. 또한 같은 배양액에 나타난 FVlll 활성도는 pCMVVlll-B

전입군은 0, 29.6, 39.6 mU/ml인 반면 pMTVlll-B 전입군에서는 0, 3.7,10.3 mU/ml이였다

.

이상과 같은 결과는 pCMVVlll-B 혹은 pMTVlll-B가 전입된 CHO 세포로부터 생물학적 활

성이 있는 FVlll 단백질이 합성되어 세포 밖으로 분비되고 있음을 입증해 주고 있다.

[영문]