급성 백혈병에서의 골수세포 생체외 배양에 관한 연구

Abstract

[한글]

조혈세포의 생체외배양, 특히 백혈병에 있어서 조혈세포중 과립구-단구계 전구세포의 생체외배양은 그 병태규명, 진단, 치료법의 선택 및 예후판정의 가능성을 제시하는 것으로 많은 연구가 있어 왔다. 그러나 각 연구자간에 재료 및 배양방법이 표준화되어 있지 않고, 배양기간과 결과 해석에 차이가 있어 아직도 논란이 많은 실정이다.

저자는 1983년 12월부터 1984년 12월까지 만 12개월간 연세대학교 부속 세브란스병원에서 급성백혈병으로 진단 및 치료를 받은 25예를 대상으로, 말초혈액 단핵구 배양액을 세포집락촉진인자로 사용, 골수세포의 생체외배양을 시행하여 다음과 같은 결과를 얻었다.

급성골수성백혈병에서 세포집락형성은 16예중 10예(62.5%)에서 관찰되었으며, 20개이상의 세포집합은 2예중 18예 (85.7%)에서 관찰되 었다. 골수유핵 세포 2×10**5 개당 세포집락은 10.5±9.34이었으며, 세포집락과 대세포집합의 합은 35.1±25.31로, 대조군의 126.3±111.63에 비해 현저히 낮았다. 세포집합은 106.8±45.24였으며, 세포집합 대 세포집락의 비는 7.3±2.64이었다.

세포집락, 세포집락과 대세포집합의 합은 여자에 비해 남자에서 현저히 낮았으며, 말초혈액내 아세포절대치와도 연관성이 많아, 아세포가 많을수록 집락형성은 잘 되지 않는 것으로 관찰되었다. 그외 다른 혈액학적 소견 및 임상상등은 배양상과 무관하였다.

세포배양시 백혈병자체의 상태는 역시 중요한 인자로 관찰되어, 초진시의 세포집락수는 9.4±7.83, 대세포집합과 집락의 합은 33.5±23.78인데 반하여 관해상태에서 시행한 배양시에는각각 74.7±37.21, 193.2±166.44로 유의한 차이를 보여주었다.

또한 추적 세포배양이 가능하였던 6예의 AML에 있어서, 진단시에는 세포집락이 10.8±8.93, 세포집락과 대세포집합의 합이 31.0±24.83 이던 것이, 관해유도시에는 각각 87.2±44.54와 165.3±79.24로 현저히 증가하였다.

이상에서 급성백혈병에 있어서 말초혈액단핵구배양액을 세포집락촉진인자로 사용한 단층한천배양법은 골수세포 생체외배양의 관찰 및 분석에 충분하였으며, 추후 이러한 생체외배양을 보다 폭넓게 사용하면, 급성백혈병의 치료 및 경과관찰에 중요한 지표로 이용할 수 있을 것으로 사료되는 바이다.

[영문]

In vitro culture of granulocyte-monocyte progenitor cells in acute leukemia has provided valuable informations on its pathogenesis, diagnosis, treatment and prognosis. But there are still some debates upon maintenance of constant activity of colony-stimulating factors, upon standardization of culture methods and interpretations.

The cloning assay was done in 25 patients with acute leukemia using single layer agar method with peripheral blood monocytes as colony-stimulating factor.

The results obtained are as follows :

1. Of the 25 cases of acute leukemia, 21 were AML and 4 ALL. The mean age was 36.9 years in AML and 34.5 years in ALL. According to the FAB classifications, M^^1 were 2 M^^2, 13, M^^3 3, M^^4 1, L1^^1 2, L^^2 2, and undifferentiated 2.

2. In control group, the cloning efficacy was 96.1% and the number of clones composed of more than 20 cells was 126.3±111.73 per 2×10**5 marrow cells.

3. In AML, the cloning efficacies of colony, colony plus large cluster, and cluster were 62.5%, 85.7% and 100% respectively. In ALL, the cloning efficacy was 100%.

4. The difference of cloning efficacy forming clones which composed of more than 20 cells between control(96.1%) and AML(85.7%) was statistically significant(p<0.05).

5. In AML, the numbers of colony, colony plus large cluster, and cluster were 10.5±9.34, 35.1±25.31 and 176.8±45.54 respectively. The cluster/colony ratio was 7.3±2.64. In 4 cases of ALL, the numbers of colony, colony plus large cluster and

cluster were 26, 176.5 and 104 respectively. The cluster/colony ratio was 4 in one case. The difference of number of colony plus large cluster between control(126.3±111.63) and AML(35.1±25.31) was stylistically significant(P<0.005).

6. There were no correlations between in vitro cell growth patterns and morphological subtypes, clinical aspects : such as age, sternal tenderness, organomegaly, fever, hemograms, and marrow findings. On the other hand, cases with high absolute blast counts in peripheral blood and male patients yielded

significant low cloning counts.

7. In patients with complete remission, the number of cloning of colony plus large culster(193.2±166.44) was similar with that of control(126.3±111.63), and was significantly different from that of untreated patients(33.5±23.78) (P<0.005). These findings were verified in 6 patients followed-up who achieved complete remission with combination chemotherapy.

Based on above results, in vitro cell culture study might be useful in prediction of prognosis in patients with acute leukemia, but the definite conclusion should he reserved until the larger number of patients with long term follow-up has been

studied.