Naegleria fowleri 감염 마우스에 있어서 림프구의 아세포화 및 아형 변동

Abstract

[한글]

자연환경속에서 자유생활을 하는 아메바인 Naegleria fowleri는 인체나 실험 동물에서

원발성 아메바성 수막뇌염을 야기하는 원충이다. 이런 원충에 의한 수막뇌염의 발생은 급

성적으로 진행되는데, N. fowleri를 마우스의 비강내로 감염시켜 실험적 수막뇌염을 일으

킴에 있어서 세포 매개성 면역에 관해서는 지연성 과민반응 정도 및 mitogen 처리에 의한

T 세포의 아세포화 정도의 관찰등이 연구 되오고 있을 뿐이며 T 세포와 그 아형들의 수

적 변동 및 DNA의 양을 측정함으로써 아세포화 정도를 관찰한 보고는 없었다. 또한 N. fo

wleri의 감염시 항체의 형성과 항체가의 변동을 관찰한 실험등이 진행되오고 있으나 B 세

포의 수적 분포 및 변동을 관찰한 보고는 없었다. 본 실험에서는 N. fowleri의 감염량을

달리하여 마우스에 감염시킨 후, 감염후 경과 기간별로 마우스의 비장세포에서 T 및 B림

프구를 분리하여 각각의 아형들에 대한 단세포군 항체를 처리하고, flow cytometry를 이

용하여 T 및 B 림프구 아형들의 변동 정도를 관찰하고자 하였다. 또한, 비장세포 T 림프

구의 아세포화 정도를 DNA 염색방법으로 측정하여 감염정도에 따른 실험성적을 비교하고

자 하였다.

Thy-1.2**+ T 세포수는 중감염군(1×10**5 개 감염, 사망율 70%)에서 7일째에 27.9%로

대조군의 23.5% 보다 증가하였다. 경감염군(1×10**4 개 감염, 사망율 15%)에서는 다소

증가하는 듯 하였으나 통계학적 유의성이 없었다. Ly-2**+ T 세포수 및 L3/T4**+ T 세포

수는 중감염군에서 7일째에 각각 10.9% 및 17.5%로 대조군의 9.1% 및 14.2% 보다 증가되

었으며, 경감염군에서는 증가하는 듯 하였으나 통계학적 유의성이 없었다. 또한 LR-1**+

B세포수는 중감염군에서 10일째에 44.6%로 대조군의 40.5%와 비교하여 증가하는 듯 하였

으나 통계학적 유의성이 없었다.

T 림프구의 아세포화정도를 알아보기 위해 DNA 합성정도(S-분획)를 측정한 결과, 중감

염군에서 감염후 7일째 및 10일째에 각각 10.9% 및 7.9%로, 대조군의 4.2% 및 4.0%와 비

교할 때 현저히 증가되었다. 또한 경감염군에서도 각각 5.5% 및 6.6%로 대조군의 3.8% 및

3.9% 보다 증가되었다.

이상의 성적을 종합해보면, N. fowleri에 의한 실험적 수막뇌염의 발생에 있어서, 영양

형 1×10**5 개를 감염시켰을 때가 1×10**4 개 감염 때보다 T 림프구수 및 아세포화 정

도가 증가 하였는데, 세포매개성 면역을 담당하는 T 세포 및 그 아형들의 수적 증가시기

가 수막뇌염에 의해 마우스가 사망하기 시작하는 시기와 일치함을 보여 주고 있어, 활성

화된 T 세포 및 그 아형들이 마우스의 방어기능에 관여하는 것으로 관찰되었다.

[영문]

In this study, the chance of blastogenesis and subpopulations of lymphocytes were

investigated in mice experimentally infected with Naegleria fowleri and developed

meningoencephalitis. Lymphocytes separated from spleen of mice were treated with

monoclonal antibodies aganist T lymphocytes, B lymphocytes and their subsets, and

observed using flow cytometry. The blastogenesis of T cell in mice infected with N.

fowleri also investigated. The DNA in T lymphocytes were stained with propidium and

observed using flow cytometry. The observed results are summarized as follows.

The amounts of Thy-1.2 **+ lymphocytes(%) in total splenocytes of mice infected

with 1×10**5 trophozoites (heavy infected mice, totality rate 70% ) were 27.9%,

which was higher than control group with 23.5% on the 7th day after infection.

There were no significant difference between heavy infected and control group after

10 days of infection. The amounts of Thy-1.2**+ lymphocytes in mice infected with

1×10**4 trophozoites(light infected mice, motality rate 15%) tended to increase,

but there was no statistically significant difference compared with control group.

The amounts of Ly-2**+ lymphocytes in heavy infected mice was 10.9%, which was

higher than control group with 9.1% on the 7th day after infection. There wase no

significant difference between light infected mice and control group. The amounts

of L3/T4**+ lymphocytes in heavy infected mice was 17.5%, which was higher than

control group(14.2%) on the 7th day after infection. The amounts of L3/T4**+

lymphocytes in light infected mice tended to increase, but compared with control

group, there was no statistically significant difference. The amounts of LR-1**+

lymphocates in heavy and light infected mice tended to increase, but there was no

statistically significant difference compared with control group.

The DNA amounts(5-fraction, %) among T lymphocytes of heavy infected mice were

10.9 and 7.9on the 7th day arid 10th day after infection respectively, which were

significantly higher than control group(4.2 and 4.0 respectively). In light

infected mice, the DNA amounts were 5.5 and 6.6 on the 7th day and 10th day after

infection respectively, which were significantly higher than control group.

In summary of studies in experimental menigoencephalitis by N. fowleri, the

subpopulation and blastogenesis of T lymphocytes are more increased in heavy

infected mice than light infected ones. Especially the relative ratio of L3/T4**+

lymphocytes was more increased than Ly-2**+ lymphocates on the 7th day after

infection in light infected mice. The subpopulations of T lymphocytes were markedly

increased since the 7 day after infection when mice began to die. Therefore, it was

suggested that the activated T lymphocytes and their subpopulations, as the number

of cells was increasing, contributed to the protectic immune response of infected

mice with N. fowleri