간암 세포 주에서 암 줄기세포 특성을 위한 최적의 구체 형성 배양 조건

Abstract

전이와 재발이 높은 간암에서 암 줄기세포를 얻기 위하여 배양 시 환경은 매우 중요하다. 구성 형성 배양은 암 줄기세포가 세포배양 접시에 부착하지 않고도 잘 자란다는 줄기세포적 특징을 이용한 방법으로서 많이 사용되고 있다. 본 실험에서는 간암 세포 주를 이용하여 세가지 종류의 배양액에서 구체 형성 배양의 효율을 비교 하였다.

간암 세포 주 Huh7, HepG2를 이용하여 각각 다른 배양액에 구성 형성 배양을 하였다. 각 군의 구체 형성 세포의 줄기세포적 특징을 분석하기 위하여 세포 증식률을 비교 하였으며, 역전위 중합 효소 연쇄 반응으로 줄기세포성 유전자 Oct4, Nanog, Sox2와 간암줄기세포에서 많이 발현된다는 EpCAM 간암의 전이와 증식에 관련 된 Connexin32, Connexin43의 발현을 확인하였다. 또한 면역세포염색법으로 암 줄기세포에서 많이 발현되는 표지자들 CD90, CD133, E-cadherin, β-catenin, 을 확인하였다. 발현되는 세포의 측정을 위하여 흐름세포 측정법을 사용하여 줄기세포 표지자들 Oct4, Nanog, Sox2와 CD133, Connexin32의 발현을 확인하였다.

구체 형성 배양 초기에는 control 배양액의 세포의 증식률이 DMEM(+)FBS, DMEM(-)FBS 배양액의 세포와 비교했을 때 높은 것을 알 수 있었다. 하지만 15일 이후부터 DMEM(+)FBS 배양액의 세포의 증식률이 높았으며 control 배양액의 세포는 줄어드는 것을 관찰 할 수 있었다. DMEM(-)FBS 배양액의 세포는 구체 형성을 하지 못하였으며 세포가 사멸 된 것을 볼 수 있었다. control, DMEM(+)FBS 군의 세포들은 유전자의 발현과 표지자의 발현이 유사하게 발현되는 것을 알 수 있었다.

위의 결과들로 보아 control, DMEM(+)FBS 배양액의 구체 형성 세포들은 유사한 특징을 갖고 있었으며, 성장인자를 넣어주지 않고 혈청이 포함된 배양액에서도 구체 형성을 하며, 증식이 가능하고 암 줄기세포의 특징을 갖고 있는 것을 확인할 수 있었다. 본 연구는 구체 형성 배양 시 성장인자의 첨가 없이 암 줄기세포의 구성 형성 배양이 가능하다면 더 간단한 방법으로 암 줄기세포의 배양이 가능할 것이며 비용적인 면에서 절감할 수 있을 것이라고 생각한다.