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조직과 배양세포에서 Envoplakin의 발현

Title
조직과 배양세포에서 Envoplakin의 발현
Other Titles
Expression of envoplakin in tissues and cultured cells
Issue Date
1999
Publisher
연세대학교 대학원
Description
의학과/석사
Abstract
[한글] 최근에 염기서열이 밝혀진 envoplakin은 plakin족에 속하는 단백으로서 케라틴필라멘트를 각질세포외막과 교소체에 연결시켜주는 역할을 한다고 알려져 있으며 최근에 종양수반성 천포창의 항원 중 하나라는 사실이 밝혀졌다. 종양수반성 천포창은 종양과 동반되어 피부와 점막에 수포를 비롯한 다양한 발진을 나타내는 질환으로서,'plakin family'에 속하는 desmoplakin I과 ll, bullouspemphigeid antigen 1(BPAG 1), envoplakin, periplakin과 desmoglein 3에 대한 항체를 가지는 자가면 역 수포성 질환의 하나이다. 이 항원들 중에서 210-kDa의 envoplakin과 190-kDa의 periplakin은 최근에 이 질환의 항원으로 밝혀졌으며, 거의 모든 환자의 혈청에서 이 두 항원에 대한 항체를 발견할 수 있다. 그러나 이 두 항원에 대한 연구는 아직 많이 이루어지지 못하여 그 역할이나 위치, 분포, 종양수반성 천포창 발생에서의 역할 등에 대해서는 잘 밝혀지지 않았다. 본 실험에서는 envoplakin의 COOH-terminus와 linker, central rod domain의 일부를 encoding하는 cDNA블론(PNP 클론)을 이용하여 만든 재조합 envoplakin을 토끼에 주사하여 envoplakin에 특이적으로 반응하는 다블론 항체를 만들었으며 이를 이용하여 여러 조직과 배양세포에서 envoplakin 발현 여부를 조사하여 다음과 같은결과를 얻었다. 1. 다클론 항 envoplakin 항체를 이용하여 마우스 조직에서 간접면역형광검사를 시행한 결과, 피부, 혀, 식도, 소장, 대장, 폐, 방광의 표피와 심근에서는 envoplakin이발현되었고 신장과 간 조직에서는 발현되지 않았다. 이상의 결과 envoplakin이 중층 편평상피뿐만 아니라 이행상피, 단순상피, 심근 등의 여러 조직에 분포하고 있음을 확인할 수 있었다. 2. 간접면역형광검사 결과 표피에서 envoplakin 발현은 주로 상부 유극층과 과립충에서 강하게 나타났으며, 면역블롯팅검사결과 고농도의 칼슘에서 배양된 각질형성세포에서 저농도에서 배양된 각질형성세포보다 envoplakin의 발현이 더 많이 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 3. Envoplakin은 배양된 각질형성세포, HaCaT 및 A-431 세포에서 발현된다는 사실을 확인할 수 있었다 이상의 결과로써 본 연구에서 합성한 envoplakin에 대한 다클론 항체가 종양 수반성 천포창의 연구 및 envoplakin의 연구에도 유용하게 이용될 수 있을 것으로 생각된다. 이 항체를 이용한 실험에서 envoplakin이 피부 이외의 다양한 조직에서 발현된다는 사실과 envoplakin의 발현이 각질형성세포의 분화와 관련이 있다는 사실을 확인할 수 있었으며, 각질형성세포 이외에 A-431 세포와 같은 암종세포에서도 발현된다는 사실을 알 수 있었다.
[영문] Envoplakin is the recently identified member of the plakin family. It is one of the cornified cell envelope precursors and may be involved in anchoring keratin filament to desmosomes. It is one of the antigen complexes of paraneoplastic pemphigus also. Paraneoplastic pemphigus(PNP) is a recently defined autoimmune bulloes disease associated with various forms of underlying neoplasia. Autoantibodies against envoplakin and periplakin are detected in almost all PNP patients.Therefore, these two proteins are believed to be important in diagnosis and pathogenesis of this disease. A single cDNA clone, called PNP clone, enconding a part of the central rod domain and the COOH-terminal C domain of envoplakin was isolated recently inour laboratory. We produced polyclonal anti-envoplakin antibody by immunization to rabbits with bacterial fusion protein that was made by transfection of PNP clone. In this study, we examined the expression of envoplakin in various tissues and cultured cells using polyclonal anti-envoplakin antibody. We could confirm the fact that the expression of envoplakin is not restricted to keratinizing stratified squamous epithelium and its expression was detected invarious tissues including small intestine, colon, lung, heart and bladder, but not in kidney and liver. Envoplakin expression was enhanced during keratinocyte differentiation as its expression was stronger in upper spinous and granular layer than in basal layer and human keratinocyte cultured in high calcium media expressed envoplakin more strongly than that cultured in low calcium mesa. We also found that envoplakin is expressed in cultured A-431 cell line, solid tumor cell line, as well as in cultured keratinocyte and immortalized keratinocyte cell line, HaCaT cell. Lastly, polyclonal rabbit anti-envoplakin antibody produced in this study may be useful in the investigation of PNP and envoplakin.
URI

http://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/126097
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2. 학위논문 > 1. College of Medicine (의과대학) > 석사
Yonsei Authors
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