만성 간질환에 있어서 molecular hybridization 검사에 의한 혈청 HBV DNA 검출에 관한 연구

Abstract

[한글]

B형 간염바이러스(hepatitis B virus; 이하 HBV로 약함)에 의한 만성간염에 있어서 간세포손상의 기전은 아직 정확하게 규명되지 않았으나 바이러스의 지속적인 증식과 면역학적기전이 함께 관여하는 것으로 알려져 있으며 적절한 치료제 선택과 그 효과판정에 있어서 바이러스 증식 여부를 확인하는 것이 필수적이다(Kam등, 1982; Bonino등, 1983; Chu등, 1985; Alberti등, 1986; Mondelli등, 1986).

여러가지 HBV증식표지자 중에서 실제로 임상에서 측정이 가장 용이한 것은 HBeAg 및 anti-HBe이며 근래에 혈청 HBV DNA polymerase측정이 전염성, 염증변화 및 예후와 밀접한 관계가 있는 것으로 알려져 있으나(Okada등, 1976; Tong등, 1977; Werner등, 1977), 이들이 숙주의 HBV존재 유무, 증식상태 및 염증반응을 항상 정확하게 나타내지는 못한다는 것이 알져져 있다. 즉 anti-HBe양성임에도 바이러스증식이 일어날 수 있고(Hadziyannis등, 1983; Lieberman등, 1983; Lok등, 1984; Chu등, 1985; Shafritz 및 Hadziyannis, 1986) HBsAg 음성 만성간질환환자에서도 HBV DNA가 검출되고 있다(Brechot등, 1982; Scotto등, 1983; Figus등, 1984; Marcellin등, 1985).

저자는 만성 간질환환자에서 DNA cloning에 의한 molecular hybridization검사로 혈청 HBV DNA를 검출하여 바이러스증식상태 및 기존의 HBV의 혈청학적 표지자중 HBeAg, anti-HBe 및 DNA polymerase 활성도와의 상관관계를 검토하고, 항바이러스치료 후에 나타나는

혈청 HBV DNA의 변화양상을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다.

1. HBsAg양성군에서 혈청 HBV DNA의 검출율은 총 99예중 61예로 61.6%였다. 그중에서 HBeAg양성인 경우는 68예중 51예로 75.0%, anti-HBe양성인 경우는 24예중 10예로 47.1%로써 HBeAg양성군에서 의의있게 높았다.

2. HBsAg음성군에서 혈청 HBV DNA의 검출율은 9예중 1예로 11.1%였다. 그중 anti-HBc와 anti-HBs가 모두 양성인 5예에서는 HBV DNA가 검출되지 않았고 anti-HBc단독 양성인 4예에서는 1예에서 (25.0%) HBV DNA가 검출되었다.

3. 혈청 HBVDNA 검출결과와 조직학적 진단을 비교한 결과 무증상 건강 HBsAg carrier에서는 11예중 4예 (36.4%), 만성지속성간염은 17예중 11예 (64.7%), 만성활동성간염 또는 간경변증은 70예중 46예 (65.7%)에서 HBV DNA가 검출되어 무증상 건강 HBsAg carrier보다 만성 간질환환자에서 혈청 HBV DNA양성율이 높았으나 만성지속성간염과 만성활동성간염간에는 차이가 없었다.

4. 혈청 HBV DNA가 양성이었던 61예에 있어서 조직학적 진단에 따라서 HBV DNA 검사치를 검토한 결과 HBV DNA치가 50pg이상인 것이 무증상 건강 HBsAg carrier에서는 4예중 2예 (50%), 만성지속성간염에서는 11예중 4예 (36.4%), 만성활동성간염 또는 간경변증에서는 6예중 5예 (10.9% )이었다.

5. 49명의 환자에서 채취한 105개의 혈청으로 HBV DNA와 DNA polymerase활성도를 동시에 측정한 결과 HBV DNA 및 DNA polymerase가 모두 양성인 경우가 65개, 모두 음성인 경우가 23개로 88개 (83.8%)의 혈청에서 일치하였다. DNA Polymerase 양성군에서 HBV DNA의 검출율은 76예중 65예로 85.5%였고, DNA Polymerase 음성군에서는 29예중 6예로 20.7%였다.

6. HBeAg양성인 만성활동성간염 12예에서 Ara-AMP투여전후에 혈청 HBV DNA치를 DNA polylnerase 및 HBeAg 변화와 비교해 본 결과 HBV DNA는 소실되어 계속 음성으로 유지되는 군과 감소되었다 치료가 끝난 후 재상승하는 군, 치료전후 계속 음성상태를 유지하는 군

등 세가지 양상을 보였으며 DNA polymerase 역시 HBV DNA와 비슷한 변화양상을 보였으나 HBeAg은 12예중 1예에서만 치료 시작 후 21일째 음전되었다.

결론적으로 HBeAg양성예의 75.0%와 anti-HBe양성예의 47.1%에서 혈청 HBV DNA가 검출되어 anti-HBe양성일지라도 일부의 환자에서는 전염이 가능함이 관찰되었고 혈청 HBV DNA의 존재유무와 조직학적진단간에는 유의한 상관관계가 관찰되지 않았으며 또한 항바이러스치료의 경과관찰과 효과판정에 HBeAg 및 DNA polymerase와 더불어 혈청 HBV DNA를 측정하는 것이 유용하다고 사료된다.

[영문]

Recent studies on the natural history of hepatitis B virus(HBV) infection have provided evidence for a close relationship between the phase of active viral replication and the development of hepatic lesions. The presence of HBeAg has been associated with active viral replication and underlying active liver disease,

whereas seroconversion from HBeAg to anti-HBe is usually accompanied by remission of the disease activity.

With the availability of the technique of molecular hybridization to detect HBV DNA in serum, it has now been confirmed that HBV may continue to relpicate after seroconversion from HBeAg to anti-HBe. In the present study, serum HBV DNA was

measured in cases of chronic HBV infection and the results were correlated with HBeAg/anti-HBe status, histological diagnosis and HBV DNA polymerase. In addition, the changes of serum HBV DNA were monitored before, during and after Ara-AMP(adenine-arabinoside 5'-monophosphate)treatment. The results were summarized as follows

1. Among 99 HBsAg positive cases, serum HBV DNA was detected in 61(61.1%). In 51 of 68(75.0%) HBeAg positive cases and 10 of 24(47.1%) anti-HBe positive, serum HBV DNA was detected. In 6 negative cases for both HBeAg and anti-HBe and 1 positive for both, serum HBV DNA was not detected.

2. Among 9 HBsAg negative cases, serum HBV DNA was detected in 1(11.1%). In 5 positive cases for both anti-HBc and anti-HBs serum HBV DNA was not detected, but in 1 of 4(25.0%) positive for anti-HBc alone serum HBV DNA was detected.

3. The serum HBV DNA was detected in 4 of 11(36.4%) asymptomatic healthy carrier, 11 of 17(64.7%) chronic persistent hepatitis and 46 of 70(65.7%) chronic active hepatitis or liver cirrhosis.

4. The levels of serum HBV DNA were below 50 pg per ml in 50 of 61(81.9%) HBV DNA positive cases. There was no significant correlation between the level of HBV DNA and histologic diagnosis.

5. DNA polymerase activity was tested in 105 sera from 49 cases and the resultes were compared to serum HBV DNA. Serum HBV DNA was detected in 65 of 76(85.5%) DNA polymerase positive sera and 6 of 29(20.7%) DNA polymerase negative sera. Meanwhile serum HBV DNA was not detected in 11 of 76(14.5%) DNA polymerase positive sera and 23 of 29(79.3%) DNA polymerase negative sera.

6. Serum HBV DNA, DNA polymerase and HBeAg were serially checked in 12 patients with HBeAg positive chronic active hepatitis who received 4 weeks Ara-AMP therapy. Before receiving Ara-AMP. 9 of 12 cases were positive for serum HBV DNA and DNA

polymerase and these all patients stowed a quantitative response in serum HBV DNA and DNA polymerase. But in only 1 of 12 cases, HBeAg was converted to negative during the course.

In conclusion, serum HBV DNA was found in 75.0%(51/68) of HBeAg positive and in 47.1%(10.24) of anti-HBe positive cases. Serum HBV DNA was detected more frequently in cases with chronic liver disease than in asymptomatic healthy carrier, but there was no significant difference between chronic persistent hepatitis and chronic active hepatitis. And serum HBV DNA appeared to be a useful marker in monitoring of the effect of anti-viral treatment.