베체트병 환자의 말초혈액에서 T 림프구의 아형과 T 림프구의 혈관 내피세포에 대한 유착

Abstract

[한글]

베체트병은 아직까지 원인과 병리기전에 대해서는 잘 알려져 있지 않다. 면역학적 이상에 의한 자가 면역이 이 질환의 병리기전에 관여하는 것으로 시사되고 있다. 베체트병에서 T 림프구 아형의 변화가 보고된 바 있고, 이 변화가 활성화된 B 림프구의 증가 및 CD8+ 억제 T 림프구 활성의 저하, 자가 혼합림프구 반응의 결함 등의 면역학적 이상과 관련될 것이라고 추측되고 있다. Suppressor-inducer(naive)와 helper-inducer(memory) T 림프구의 새로운 아형이 발견되면서 면역학 및 임상의학에 이 T 림프구 아형들의 중요성이 보고되고 있다. Suppressor-inducer T 림프구는 CD8+ 억제 T 림프구를 활성화시키며, B 림프구로부터 면역글로불린 생성을 억제하는 기능이 있다. Helper-inducer T 림프구는B 림프구로부터 항체 생성을 증가시키고, 비활성 CD8+ 세포독성 T 림프구를 제일 주요조직 적합복합체 제한 세포독성 T 림프구로 활성화시키는데 관여한다. 혈관염이 주된 병리학적 소견이라는 점에서 베체트병의 병인에 혈관 내피세포의 역할은 매우 중요할 것으로 생각되나, 이 질환에서 혈관 내피세포와 T 림프구의 유착에 관한 연구는 거의 없었다. 따라서 본 연구에서는 T 림프구의 숫적 변화 혹은 혈관 내피세포에 대한 T 림프구 유착능력의 차이가 베체트병의 병인에 관여하는지를 규명하고자 첫째, 정상대조군과 베체트병 환자에서 T 림프구를 채취하여 CD4, CD8, CD45RA, C045RO에 대한 단클론 항체를 이용한 이중색 면역형광 유량 세포분석(two-color immune-fluorescence flow cytometric analysis)을 시행하여 정상대조군에 비해 베체트병 환자에서 T 림프구 아형에 차이가 있는지를 관찰하고 둘째, interleukin-1(IL-1)α 혹은 tumor necrosis factor(TNF)-α로 자극전, 후의 배양한 인체 진피 미세혈관 내피세포(human dermal micnvascular endothelial cells: HDMEC) 단층에 정상대조군 및 베체트병 환자의 T 림프구를 처리한 후 유착도의 차이를 관찰하여

다음과 같은 결과를 얻었다.

1. CD4+ T 림프구는 베체트병 환자에서 정상대조군에 비해 통계학적으로 유의하게 감소하였으며, CD4+/CD8+ 비도 베체트병 환자에서 정상대조군에 비해 통계학적으로 유의하게 감소하였다.

2. 이중색 면역형광 유량 세포법으로 분석한 CD4+ T 림프구 아형은 베체트병 환자에서 정상대조군에 비해 CD4+CD45RA+ naive T 림프구의 비율이 유의하게 낮았던 반면, CD4+CD45R0+ memory T 림프구 비율은 유의하게 증가되었다.

3. HDMEC에 처치한 T 림프구의 수가 증가할수록 IL-lα 혹은 TNF-α 처치 후 베체트병 환자와 정상대조군 모두에서 HDMEC에 대한 T 림프구의 유착도가 의의있게 증가하였으나, 그 증가율은 베체트병 환자에서 정상대조군에 비해 의의 있게 높았다.

4. CD4+CD45RA+ naive T 림프구와 CD4+CD45R0+ memory T 림프구의 유착도 실험에서는 베체트병 한자와 정상대조군 모두에서 IL-1α와 TNF-α 처치 후 HDMEC에 대한 유착도가 정상대조군과 베체트병 환자에서 의의있게 증가하였으며, 증가율은 정상대조군에 비해 베

체트병 환자에서 높았다. 하지만 두군 모두에서 memory T 림프구와 naive T 림프구간의 의의있는 유착도의 차이는 관찰되지 않았다.

이상의 결과에서 베체트병 환자에서 관찰되는 CD4+CD45RA+ naive T 림프구의 감소는 CD8+ 억제 T 림프구가 활성화되지 못하고 비활성 상태로 존재하게 하여 베체트병에서 관찰되는 억제 T 림프구의 기능 이상과 관련될 것이라고 추측되며, 베체트병 환자에서 HDMEC에 대한 말초혈액 T 림프구의 유착도 증가는 베체트병 환자의 병변에서 말초혈액 림프구와 내피세포간의 부착, 림프구의 병변부위로의 이동, 혈관주위 염증세포 침윤과 관계될 것으로 생각된다.

[영문]

Behcet's disease represents a polygymptomatic, recurrent vasculitis with a chronic course. Its etiology and pathogenesis still remains unc1ear. Several immunological abnormalities have been described in this disease and especially altered cell mediated immunity has been suggested to play an important role in the pathogenesis. Recently, suppressor- inducer(naive , CD4+ CD45RA+) and helper- inducer(memory , CD4+ CD45R0+)human T cell subsets have been identified by their relevant monoclonal antibodies. A vascular reaction or vasculitis of lymphocytic type with necrotizing features is the histological counterpart of the diverse mucocutaneous lesions of Behcet's disease. It bas been suspected that human dermal micmvascular endothelial cells(HDMEC) are important part in the pathogenesis of Behcet's disease. However, there was no report for HDMEC-T Iymphocyte adhesion in

Behcet's disease.

We have investigated the subpopulation differences in CD4+ T lymphocytes and the adhesiveness of T lymphocytes to cultured HDMEC in the presence of IL-lα, or TNF-α using T lymphocytes isolated from normal human subjects and Behcet's disease patients respectively. T lymphocyte subsets were evaluated by the two- color immune-fluorescence flow cytometric analysis using anti CD4-, CD8-, CD45RA- and CD45R0 monoclonal antibodies. The binding assay of T lymphocytes to HDMEC was performed before and after stimulating HDMEC with IL-lα or TNF-α.

1. The number of CD4+ T cells and the CD4+ to CD8+ ratio decreased in patient with Behcet's disease compared to normal controls.

2. In the CD4+ T cell subpopulatioiN there was a significant decrease in the CD4+CD45RA+ cell number with a slight increase in the CD4+CD45R0+ cell number.

3. After stimulating HDMEC with IL-lα and TNF-α, the degree of T lymphocye-HDMEC adhesion generally increased by E:T ratio dependent manner in patient with Behcet's disease compared to normal controls.

4. Increased binding of CD4+CD45RA+ naive T lymphocytes and CD4+CD45R0+memory T lymphocytes to HDMEC was induced after stimulation with IL-lα and TNP-α in both patients and normal controls. The increasing rate was higher in Behcet's disease patients than in normal controls. There was no difference in T lymphocyte-HDMEC adhesion between memory and naive T lymphocytes. From these finding it can be postulated that the decrease in the CD4+CD45RA+count may lead to the inactivation of CD8+ suppressor cells resulting in abnormal immune suppression shown in Behcet's

disease. Proinflammatory cytokines may also play an integral role in the pathogenesis of Behcet's disease by activating endothelial cells increasing the interaction between T lymphocytes and endothelial cells. Increasing the interaction between T lymphocytes and HDMEC may be indirect evidence of activation of

cell-mediated immunity.