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비결핵 항산균(MOTT) 균종의 DNA-DNA hybridization법을 이용한 신속한 동정

Title
 비결핵 항산균(MOTT) 균종의 DNA-DNA hybridization법을 이용한 신속한 동정
Other Titles
 Factors affecting DNA-DNA hybridization for the identification of mycobacterium species
Issue Date
1997
Publisher
 연세대학교 보건대학원
Description
역학 및 질병관리학과/석사
Abstract
[한글] 우리 나라의 Mycobacterium tuberculosis에 의한 폐 감염은 감소하였다가 최근에 다시 증가경향을 보이고 있으며, M.tuberculosis 이외의 균종(Mycobacterium other than M.tuberculosis, MOTT)에 의한 감염은 현저히 증가되고 있어서 그 중요성이 강조되고 있다. 즉, MOTT 균종의 빠른 동정은 분리된 균주가 감염균인지를 결정하는데 도움이 될 뿐 아니라 환자의 치료 방침을 정하는 근거가 된다. 따라서 M.tuberculosis 뿐 아니라 MOTT의 동정은 매우 중요한 일이다. 대부분의 Mycobacterium은 증식이 늦어 종래의 생화학적 동정 방법으로는 최소한 1개월 이상의 기간이 필요하다. 최근 분자 생물학적 방법을 쓰는 PCR이나 gene probe 동정방법이 시도되고 있으나, 이러한 방법들은 주로 M.tuberculosis, M.intracellulare, M.avium 등의 일부 균만을 동정할 수 있는 것이고 실제 30여종 이상이나 되는 MOTT 모두를 동정할 수는 없다. 1991년 Ku sunoki등은 4시간만에 Mycobacterium 22종을 동정할 수 있는 hybridization법을 보고하였다. Hybridization법의 성적은 nucleic acid의 상태, 반응 조건 및 검출방법에 따라서 달라지게 되는데 이들의 상세한 방법은 알 수 없다. 이에 이 연구에서는 사람의 검체에서 분리되는 Mycobacterium을 hybridization법으로 동정할 때 필요한 시약의 조성과 시험조건의 반응에 대한 영향을 검토하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. TMB는 methanol에 용해시킬 때 가장 안정하였고 가장 높은 흡광도를 보였다. 2. TMB 0.3-0.6 mg/ml H^^2O^^2는 0.08-0.16 mM 농도일 때 HRP 반응 흡광도가 가장 높았다. 3. HRP 활성은 TMB 희석액이 pH 5.0인 CE 용액일 때 높았다. 4. Hybridization 용액 중 SSC 반응의 흡광도는 4 x SSC 용액을 사용할 때 가장 높았다. 5. 동정용 균주 DNA를 열처리하면 광선처리만 하는 경우 보다 흡광도가 높았다. 위 결과들과 일차 배양된 배지에서의 집락 형태와 함께 이용하면 임상검체에서 흔하게 분리되는 Mycobacterium의 균종을 쉽고 빠르게 동정할 수 있을 것이라는 결론을 얻었다.
[영문] Pulmonary tuberculosis caused by to Mycobacterium tuberculosis remain very prevalent in Korea, while increase of infection due to Mycobacterium other than M. tuberculosis (MOTT) was reported. Clinical significance of M. tuberculosis and MOTT are quite different, requiring their accurate identification of Mycobacterium sp. by conventional biochemical methods usually require at least 4 weeks and the results are often equivocal. Identification by PCR and gene probe method are rapid, but among the more than 30 species of Mycobacterium only a few species such as M. tuberculosis, M. interacellulare and M. avium can be identified. A method of DNA-DNA hybridization for the identification of 22 species of Mycobacterium was reported, but the detailed is not known. The aim of the study was to compare the composition of reaentsand factors affecting DNA-DNA reaction hybridization for the species identification of Mycobacterium. The following results were obtained. 1. The stock solution of tetramethylbenzidine (TMB) was most stable and gave high optical density (O.D.) when prepared with methanol. 2. Optimal concentrations of TMB and H^^2O^^2 for horseradish peroxidase (HRP) were 0.3-0.6 mg/ml and 0.08-0.16 mM, respectively. 3. HRP reaction was highest with pH 5.0 citrate EDTA buffer. 4. Highest O.D. was observed with the hybridization solution consisting of 4 x SSC, 10% dextran sulfate, 100 ㎍ salmon DNA. 5. Heating of sample DNA before light treatment enhanced hybridization reaction. It is concluded from the study that with the above reagents and conditions, most of the commonly isolated Mycobacterium species can be identified with the colonies formed on the primary culture medium.
URI
http://ir.ymlib.yonsei.ac.kr/handle/22282913/118388
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2. 학위논문 > 4. Graduate School of Public Health (보건대학원) > 석사
Yonsei Authors
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