게와 굴에서의 Vibrio vulnificus분리 및 그 선택배지에 관한 연구

Abstract

[한글]

V.vulnificus는 창상감염이나 치명적인 패혈증을 일으킬수 있는 세균이다. 우리나라에서도 패혈증형 감염이 보고되어 있으나 해산물의 이 세균 오염에 대한 연구는 아직 없다.

이 연구에서는 해산물에서의 V.vulnificus 분리를 용이하게 할 수 있는 선택배지의 제조를 시도하였다. 4℃ 혹은 -20℃ 처리로 V.vulnificus를 선택적으로 증균할수는 없었으며 42℃에서의 배양으로도 선택적으로 배양할 수 없었다. 또한 colistin 32㎍/ml 함유 액체증균배지에서도 V.vulnificus만 선택적으로 증균할 수 없었다. 그러나 OF base medium에 lactose를 넣은 배지에서 48시간 배양후에 V.vulnificus의 일부 집락이 노란색을 띄어 다른 세균의 집락과 구별이 되었다.

OF-Lactose 배지를 이용하여 몇몇 해산물에서의 V.vulnificus 분리를 시도하였는 바, 게에서는 분리하지 못하였으나 굴 43검체중 3검체에서는 분리되었다. sucrose에서의 산생성은 1주는 음성, 다른 2주는 양성이었다.

해산물에서 V.vulnificus를 더 쉽게 분리할수 있기 위하여는 선택력이 더 크고 감별능이 좋은 배지가 필요하다고 판단되었다.

우리나라 굴도 V.vulnificus로 오염이므로 되어 있음이 밝혀졌으므로 굴의 생식은 V.vulnificus 감염의 원인이 된다고 보아야 할 것이다.

둘째형은 해수로 오염된 창상이나 계로 인한 창상의 감염인대 기존 질환이 없는 젊은 사람에서 볼 수 있다.

우리나라에서도 패혈증 환자의 혈액에서 V.vulficus가 관리된 바 있으며 문헌 고찰이가능 하였던 것만도 10예가 넘으며(Chong등, 1982 :구등, 1982: 김등 (1983), 김등(1983)은 매년 5-10명의 환자를 관찰하였다고 하였다. 이수를 1964-1977년에 48검체가 CDC에 의뢰된 미국(Blake등, 1979)에 비하면 우리나라에 더 흔한 감염으로 생각된다. 김등(1984)은 혈액배양에서 분리된 세균의 재검토에서 4예의 패혈증을 보고하였다. 이러한 사실은 이 세균이 과거에는 다른 세균으로 잘못 동정되었음을 증명한 것이라고 하겠다.

V.vulnificus를 해수나 해산물에서 분리한 보고는 외국에서도 소수가 있을 뿐이다 (Blake 등, 1980). 우리나라의 해수나 해산물에서의 V.parahaemolyticus분리에 관한 연구는 대단히 많다(Aoki등, 1967), 이러한 연구에 있어서는 V.cholerae와 V.parahaemolyticus의 선택 배지인 Thiosulfate citrate bile salts sucrose(TCBS) agar가 널리 쓰인다. 이 배지에서 V.parahaemolyticus와 V.vulnificus는 집락형태가 같기 때문에 서로 감별해낼수가 없다. 따라서 해수나 해산물 중에서 V.vulnificus를 검출하기 위해서는 V.vulnificus의 집락을 알아 볼 수 있는 선택배지가 필요하다. 이에 저자는 V.vulnificus 의 선택배지를 만들고저 시도하였으며 아울러 그 배지에 의하여 우리나라 해산물의 V.vulnificus 오염여부를 밝히고저 본 실험을 계획 하였다.

[영문]

Vibrio vulnificus is a motile facultative gram-negative bacillus inhabiting marine waters. This organism causes two types of infection. Fatal septicemias are found among elderly persons with underlying hepatic diseases and history of raw oyster consumption. Nonfatal wound infections are found among young people with crab bite or sea water contaminated wound.

In Korea, more than 10 cases of fatal septicemic type of V.vulnificus infections were reported during the past few years. Nevertheless, we know nothing about the state of contamination of local oyster or crab by this organism. It was essential to study on these matters in order to prevent the infection. TCBS agar is the commonly used media for the isolation of V.cholerae and V.parahaemolyticus. But this medium is not suitable for the isolation of V.vulnficus.

In this study an attempt was made to prepare selective medium which can differentiate V.vulnificus from other vibrios. Stock strains of V.vulnificus, V.alginolyticus and V. parahaemolyticus were used. Also an attempt was made to isolate V. vulnificus from samples of oyster and crab, sold at the local market.

The following results were obtained.

Storage of inoculated broth at 4℃ or at -20℃ failed to select V.vulnificus from other vibrios. Incubation at 42℃ also failed to grow V.vulnificus selectively. Among many antimicrobials, only colistin had slightly higher MIC than others, i.e., 64㎍/ml. Tryptic soy broth containing 32 ㎍/ml of colistin failed to enrich V.vulnificus selectively. A new medium was fromulated using oxidation-Fermentation medium (OF basal medium). Namely lactose 2%, colistin 32 ㎍/ml, clindamycin 1 ㎍/ml and others were incorporated into the OF basal medium (OF-Lactose medium). After 48-hour incubation of the new medium some of the V.vulnificus colonies could be differentiated from other vibrios by its slightly yellowish color.

Using OF-Lactose medium a trial was made to isolate V.vulnificus from oyster and crab. During July 1983 to May 1984 a total of 48 oyster samples were cultured. Three specimens yielded V.vulnificus. One of which showed typical cultural reactions with acid negative from sucrose. Two remaing isolates were acid positive. During the same period of time samples of crab were also cultured. None of them yielded V.vulnificus.

OF-Lactose medium allows to grow various other bacteria besides V.vulnificus. The V.vulnificus clolnies on the medium are not fully characteristic to satisfy its differentiation. Therefore a further improvement of this medium is imperative. Although the number of isolates is limitted, this study was the first documented isolation of V.vulnificus from sea food in Korea. More studies are needed to determine the extent of contamination of this organism to various foods.